[发明专利]一种犬瘟热病毒复制缺陷毒株及其构建方法在审
| 申请号： | 201910033605.3 | 申请日： | 2019-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN109750006A | 公开（公告）日： | 2019-05-14 |
| 发明（设计）人： | 黄娟;单虎;林佳旭;秦志华 | 申请（专利权）人： | 青岛农业大学 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N5/10;A61K39/175;A61P31/14;C12R1/91 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 266100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种犬瘟热病毒的犬瘟热病毒复制缺陷株的拯救及验证，该系统包含：转录质粒，所述转录质粒pCI‑CDV‑SD16F能够表达所述犬瘟热病毒流行毒株SD16F的基因组全长cDNA序列，经定点突变后的pCI‑CDV‑SD16F‑M质粒为不表达M蛋白的重组质粒；和一个或多个辅助质粒，所述辅助质粒能够表达所述犬瘟热病毒SD16F流行毒株的核蛋白(NP)、磷蛋白(P)和大聚合酶蛋白(L)；可稳定表达SD16F M蛋白的Vero‑SLAM‑M细胞系。通过上述反向遗传操作系统，成功的拯救出重组复制缺陷犬瘟热病毒。本研究所述的犬瘟热病毒流行毒株复制缺陷毒株为新型犬瘟热基因工程生物防治制剂的研制创造了便利条件及犬瘟热病毒相关基础研究提供了极佳的技术平台。 | ||
| 搜索关键词： | 犬瘟热病毒 复制缺陷 流行毒株 辅助质粒 转录质粒 毒株 核蛋白 反向遗传操作系统 基因组全长cDNA 大聚合酶蛋白 生物防治制剂 重组复制缺陷 定点突变 基础研究 基因工程 技术平台 稳定表达 重组质粒 磷蛋白 犬瘟热 构建 质粒 验证 便利 成功 | ||
【主权项】：
1.一种构建犬瘟热病毒流行毒株复制缺陷毒株的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：1)在转录质粒中插入不表达M蛋白的犬瘟热病毒基因组全长cDNA序列，获得重组质粒；2)构建辅助质粒，所述辅助质粒能够表达犬瘟热病毒的核蛋白NP、磷蛋白P及大聚合酶蛋白L；3)构建表达犬瘟热病毒M蛋白的细胞系，所述的细胞系为Vero‑SLAM‑M细胞系；4)使用重组质粒和辅助质粒共转染表达犬瘟热病毒M蛋白的细胞，从转染细胞的细胞悬液中拯救出重组犬瘟热病毒流行毒株复制缺陷株。
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