[发明专利]一种基于BMCA纳米抗体序列的嵌合抗原受体的构建方法及其应用

摘要

本发明涉及细胞免疫技术领域，且公开了一种基于BMCA纳米抗体序列的嵌合抗原受体的构建方法及其应用，步骤一：BCMA单域抗体文库构建，步骤二：BCMA特异性纳米抗体序列筛选，步骤三：嵌合抗原受体T细胞制备；其主要应用在肿瘤治疗药物中，所述肿瘤为血液相关的肿瘤疾病，所述血液相关的肿瘤疾病为主要包括各类白血病和恶性淋巴瘤。该基于BMCA纳米抗体序列的嵌合抗原受体的构建方法及其应用，制备出的纳米抗体表达序列更短，节省有限的慢病毒载体空间，基于该抗体构建的嵌合抗原受体T细胞特异性更好，肿瘤杀伤能力更强。

主权项

1.一种基于BMCA纳米抗体序列的嵌合抗原受体的构建方法，其特征在于：具体步骤如下：步骤一：BCMA单域抗体文库构建通过大肠杆菌表达BCMA蛋白的胞外区域(1‑54氨基酸)对羊驼进行定期免疫，免疫期间通过取血采样，评估免疫反应效果，免疫结束后，取外周血通过淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，提取淋巴细胞RNA并反转录成cDNA，通过引物将VHH序列扩增出来后插入噬菌体展示载体，并通过电转化将携带有单域抗体基因片段的产物转入感受态大肠杆菌，从而获得单域抗体免疫文库。步骤二：BCMA特异性纳米抗体序列筛选利用噬菌体展示技术将单域抗体分子展示于噬菌体表面，进而筛选出抗原特异性的单域抗体，将BCMA蛋白包被到96孔板中，通过Elisa实验3‑5轮筛选，BCMA特异性的噬菌体逐步得到富集。步骤三：嵌合抗原受体T细胞制备将胞外分泌信号序列、BCMA纳米抗体序列、铰链区、跨膜区和胞内的信号段串联起来，克隆到慢病毒载体，与包装质粒共转染到293T细胞，纯化浓缩慢病毒后感染T细胞，即可获得针对BCMA的嵌合抗原受体T细胞。