[发明专利]基于多价捕获并放大输出信号的生物靶标分子检测方法

摘要

本发明公开了一种基于多价捕获并放大输出信号的生物靶标分子检测方法，属于生物检测技术领域。所述检测方法包括：往待测溶液中加入识别探针，对目标生物靶标分子识别结合并释放引发序列，引发序列打开发夹探针发生杂交链式反应，再加入辅助探针，封闭未参与反应的发夹探针，然后将金界面上自组装有捕获探针的载体置于反应溶液中，将杂交链反应产物捕获到金片上，最后分析金界面上的信号标记变化，进而计算出待测样本中目标生物靶标分子的含量。本发明通过杂交链式反应形成多支杂交链式反应产物，再利用界面多价捕获，信号放大输出，进而实现靶标分子的检测；在辅助探针帮助下，提高传感界面捕获杂交链式反应产物的效率，提高检测灵敏度。

主权项

1.一种基于多价捕获并放大输出信号的生物靶标分子检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)合成识别探针：设计组成核酸框架的4条探针A、B、C、D，自组装形成核酸框架结构FNAs/apt，其中A包含特异性识别并结合目标生物靶标分子的核酸适配体序列apt，B包含与apt的部分序列互补的a序列；(2)合成发夹探针、辅助探针及捕获探针：根据a序列设计发夹探针H1和H2，H1包括H1b、H1a’、H1c三个部分，其中H1a’的部分序列与H1c的部分序列互补成双链作为H1发夹结构的茎部，H1a’为a序列的互补序列；H2包括H2a和H2c’两个部分，其中H2a的部分序列和H2c’的部分序列互补成双链作为H2发夹结构的茎部，H2a与H1a’互补，H2c’与H1c互补，根据H1序列设计辅助探针blocker，blocker包括b1和b2，b1与H1b的部分序列互补，b2与H1a’的部分序列互补，根据H1序列设计捕获探针，设计组成核酸框架的4条探针E、F、G、H，自组装形成核酸框架结构，其中E包含与H1b互补的Eb’序列；或者，H1包括H1a’和H1c两个部分，其中H1a’的部分序列与H1c的部分序列互补成双链作为H1发夹结构的茎部，H1a’为a序列的互补序列；H2包括H2b、H2a和H2c’三个部分，其中H2a的部分序列和H2c’的部分序列互补成双链作为H2发夹结构的茎部，H2a与H1a’互补，H2c’与H1c互补，根据H2序列设计辅助探针blocker，blocker包括b1和b2，b1与H2b的部分序列互补，b2与H2a的部分序列互补，根据H2序列设计捕获探针，设计组成核酸框架的4条探针E、F、G、H，自组装形成核酸框架结构，其中E包含与H2b互补的Eb’序列；所述H1或H2上修饰有信号标记；(3)基于杂交链式反应多价捕获进行生物靶标分子检测：往待测溶液中加入识别探针FNAs/apt、发夹探针H1、H2，混合，室温下反应，形成杂交链反应产物，再加入辅助探针blocker，然后将金界面上自组装有捕获探针的载体置于反应溶液中，将杂交链反应产物捕获到金片上，最后分析金界面上的信号标记变化，进而计算出待测样本中目标生物靶标分子的含量。