[发明专利]脐带间充质干细胞的培养方法

摘要

本发明涉及医疗领域，尤其涉及脐带间充质干细胞的培养方法。本发明的构建包括：1、脐带消毒处理：（a）用75%酒精处理脐带表面。（b）手工去除脐带外膜。（c）脐带组织的无菌处理。2、脐带组织的分离。3、脐带间充质干细胞的制备和培养：（a）无菌手工处理组织。（b）无菌剪碎组织至1立方毫米大小的颗粒。（c）消化酶处理3b项中制备的组织。（d）清洗离心分离和收集细胞。（e）原代细胞培养。4、脐带间充质干细胞的安全存储：（a）无菌方式收集细胞在CryoFlex 2mlEP冷冻存储管。（b）存储管加内旋式密封盖。（c）存储在Cry Extra高效气相液氮存储罐气相中。

主权项

1.脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于，包含如下步骤，一、对脱离人体的脐带间充质干细胞制备时脐带的处理；a)用0.9%无菌生理盐水冲洗脐带，去除肉眼可见的污物和残留血液；b)用75％医用酒精浸泡3分钟；c)手工分离去除0.5mm左右的脐带外表面，去除过程中外表面不接触无菌的内侧组织；二、脐带间充质干细胞的制备和培养；d)使用无菌组织剪处理脐带组织至小于1mm3大小；e)将剪碎的组织接种于直径10cm培养皿中，密度1‑2g组织/培养皿；f)加入10mlCellCure干细胞培养液，并轻轻晃动使组织块均匀分散；g)将培养皿放入37℃、5%二氧化碳培养箱；h)常规收集存储原代（P0）和培养后收集第一代（P1）、二代（P2）脐带间充质干细胞；；i)培养采用Dulbecco′s modified eagle′s medium(DMEM，Gibco，USA)， 1％glutamine(Gibco，USA)及无血清培养液 ；三、脐带间充质干细胞的安全存储；j)脐带间充质干细胞以无菌的方式收集在CryoFlex 2ml EP冷冻存储管中；k)含有脐带间充质干细胞的存储管加密封盖；l)加盖后的细胞存储管进一步用高质量聚酯膜双层膜覆盖；m)使用专用存储架，存储于Cry Extra高效气相液氮存储罐气相中；n)所有经以上方法处理的细胞存储在Thermo Scientific Cry Extra高效液氮存储罐的摄氏‑196度的气相中。