[发明专利]一种含葡萄糖氧化酶和酿酒酵母的霉菌毒素生物降解剂及其应用

摘要

本发明涉及含葡萄糖氧化酶和酿酒酵母的霉菌毒素生物降解剂及其应用，有效解决霉菌毒素生物降解剂的生产，及降解黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素和T‑2毒素，实现在仔猪和肉鸡霉变饲料中的应用问题，由质量比：葡萄糖氧化酶和酿酒酵母yk18发酵培养物1︰1～9制成；葡萄糖氧化酶为粉末状饲料添加剂葡萄糖氧化酶，酶活力≥2000 u/g和酶活力≥5000 u/g，或液体饲料添加剂葡萄糖氧化酶，酶活力≥10000 u/mL；将酿酒酵母yk18在平板种子培养基上活化，以v/v计2%转接于含液体发酵培养基中培养，再按v/v计5%加入液体发酵培养基，得到酿酒酵母yk18液体发酵培养液，然后固体培养基密封培养，风干。本发明方法简单，易生产制备，降解剂的酶活力强，是霉菌毒素生物降解剂上的创新。

主权项

1.一种含葡萄糖氧化酶和酿酒酵母的霉菌毒素生物降解剂，其特征在于，是由质量比：葡萄糖氧化酶和酿酒酵母yk18发酵培养物1︰1～9混合均匀制成；所述的葡萄糖氧化酶为粉末状饲料添加剂葡萄糖氧化酶，酶活力为≥2000 u/g和酶活力≥5000 u/g，或液体饲料添加剂葡萄糖氧化酶，酶活力≥10000 u/mL；葡萄糖氧化酶的酶活力定义为在pH为6.0，温度为30℃的有氧条件下，每分钟催化1μmol的β‑D‑葡萄糖转化为D‑葡萄糖酸和过氧化氢所需的酶量即为一个葡萄糖氧化酶酶活性单位（U）；所述的酿酒酵母yk18为2018年10月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No：16598的酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；所述的酿酒酵母yk18发酵培养物的制备方法是：a、生产菌种的制备：将低温保存的酿酒酵母yk18在平板种子培养基上活化，挑取单菌接种于含液体发酵培养基的试管中，32℃，200r/min摇床培养24小时后，以v/v计的2%转接于含液体发酵培养基的500ml的三角瓶中，32℃，200r/min摇床培养24h，得到酿酒酵母yk18发酵培养种子液；b、液体深层有氧发酵：在1000ml的三角瓶加入液体发酵培养基300ml,按v/v计的5%添加量加入液体发酵种子液15ml,32℃，200r/min摇床培养24h，得到酿酒酵母yk18液体发酵培养液；c、固体无氧发酵：在1000ml的三角瓶中加入固体发酵培养基200g，按质量比3％的添加量将酿酒酵母yk18液体发酵培养液6g加到含固体培养基的三角瓶中，用无菌玻璃棒搅拌均匀，密封瓶口，放于32℃恒温培养箱中培养48h，均匀散于瓷盘中，室温风干，粉碎过60‑80目筛，经检测含酿酒酵母活菌≥2.5×108个/g，即为酿酒酵母yk18发酵培养物；所述的种子平板培养基是：将10g酵母膏和20g蛋白胨于900ml溶解于水中，加入20g琼脂粉，121℃灭菌20min，加入100ml 含20g葡萄糖灭菌溶液，调pH值6.5，制成斜面或平板培养基；所述的种子液体培养基是： 将酵母膏10g和蛋白胨20g溶解在900ml水中，121℃灭菌20min，加入100ml 含20g葡萄糖灭菌溶液，调pH值6.5；所述的液体发酵培养基是：称取麦芽汁培养基（市售）130.1g，加入蒸馏水或去离子水1000ml，搅拌加热煮沸至完全溶解，121℃灭菌20min；所述的固体发酵培养基是：按质量配比麸皮∶玉米芯粉∶玉米粉∶豆粕粉＝4﹕2﹕2﹕2,按培养基干物质的总质量添加3%硫酸铵，加水使培养基含水量达到68%，pH值6.5，121℃灭菌60mi；所述的麸皮、玉米芯粉、玉米粉、豆粕粉均过80目筛，含水量﹤10.0%，其中麸皮：粗蛋白≥15.0%，粗纤维﹤9.0%，粗灰分﹤6.0%；玉米芯粉：粗蛋白≥2.2%，粗纤维﹤29.7%，粗灰分﹤6.0%；玉米粉：粗蛋白≥10.0%，粗纤维﹤9.0%，粗灰分﹤6.0%；豆粕粉：粗蛋白≥44.0%，粗纤维﹤5.0%，粗灰分﹤6.0%。