[发明专利]一种检测多个样品时测序文库的构建方法及其应用在审
| 申请号： | 201910056472.1 | 申请日： | 2019-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN109797437A | 公开（公告）日： | 2019-05-24 |
| 发明（设计）人： | 周骋 | 申请（专利权）人： | 北京爱普益生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京知呱呱知识产权代理有限公司 11577 | 代理人： | 孙进华;吴林 |
| 地址： | 100176 北京市大兴区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测多个样品时测序文库的构建方法及其应用，该构建方法包括：步骤一、根据基因组DNA序列分别设计上游引物和下游引物；步骤二、在每条上游引物上添加A接头和第一标签，得到上游融合引物，在每条下游引物上添加P接头和第二标签，得到下游融合引物，并将上游融合引物与下游融合引物混合得到混合融合引物；步骤三、将混合融合引物、基因组DNA、含有Mg2+，dNTPs，Taq酶的Tris‑HCl缓冲液和无核酸酶水配制成多重PCR反应体系；步骤四、将得到的多重PCR反应体系进行PCR反应、纯化得到多样品测序文库；本发明构建方法通过上下游引物上不同标签组合识别样品，能够大大降低引物合成量，此外，还能够减少扩增次数，有效降低样品间的数据不均衡。 | ||
| 搜索关键词： | 融合引物 构建 测序文库 多重PCR反应 上游引物 下游引物 种检测 标签 基因组DNA序列 无核酸酶水 基因组DNA 标签组合 引物合成 上游 不均衡 多样品 缓冲液 扩增 引物 应用 | ||
【主权项】：
1.一种检测多个样品时测序文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、根据基因组DNA序列分别设计上游引物和下游引物；步骤二、在每条上游引物上添加A接头和第一标签，得到上游融合引物，在每条下游引物上添加P接头和第二标签，得到下游融合引物，并将上游融合引物与下游融合引物混合得到混合融合引物；步骤三、将混合融合引物、基因组DNA、含有Mg2+，dNTPs，Taq酶的Tris‑HCl缓冲液和无核酸酶水配制成多重PCR反应体系；步骤四、将得到的多重PCR反应体系进行PCR反应、纯化得到多样品测序文库。
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