[发明专利]一种多杀菌素的生产方法

摘要

本发明提供了一种多杀菌素的生产方法，属于发酵工程技术领域，该方法通过优化多杀菌素的发酵及分离纯化过程，包括在发酵培养液中加入卵磷脂、优化培养基组分及培养条件、在发酵过程中进行物料的补加以及分离纯化过程中的提取工艺的改进，增加了刺糖多孢菌的活性，同时提高了其产率与纯度，具有环境污染小、成本低、效率高、工艺简单等优点。

主权项

1.一种多杀菌素的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)发酵：/nS1：斜面培养：将刺糖多孢菌在斜面培养基上培养，制成孢子悬液；/nS2：种子培养：将步骤S1得到的孢子悬液接种于种子活化培养基中，得到种子液；/nS3：发酵培养：将步骤S2得到的种子液转入发酵培养基中，依次进行三次物料补加，第一次补加植物油和卵磷脂，第二次补加葡萄糖和玉米浆，第三次补加玉米浆，得到发酵液；/n(2)分离、纯化：/nS4：发酵液预处理：向发酵液中加入碱液，调节pH并搅拌，离心得到固体A和清液；/nS5：吸附剂吸附：向步骤S4得到的清液中加入大孔网状吸附剂，加热搅拌后离心，得到固体B；/nS6：混合干燥：将步骤S4得到的固体A与步骤S5得到的固体B混合，然后真空干燥，得到干燥后的混合物；/nS7：索氏提取：将步骤S6得到的干燥后的混合物加入提取剂浸渍，同时超声，进行第一阶段回流提取后再次浸渍，而后进行第二阶段回流提取，旋转蒸发得到浓缩液；/nS8：析晶、分离及干燥：调节步骤S7中浓缩液的pH得到结晶液，而后离心得到湿晶，将湿晶干燥后得到多杀菌素；/n步骤S3所述的发酵培养基组分按质量浓度计，包括：葡萄糖30-40g/L、可溶性淀粉15-20g/L、玉米浆8-12g/L、棉籽粉3-8g/L、豆饼粉3-8g/L、植物油15-20g/L、无机盐1-2g/L和卵磷脂0.5-1g/L；/n步骤S3所述的第一次补加卵磷脂和植物油，各组分按质量浓度计，分别为：卵磷脂2g/L和植物油1g/L；所述的第二次补加葡萄糖与玉米浆，各组分按质量浓度计，分别为：葡萄糖3g/L和玉米浆1g/L，所述的第三次补加玉米浆的质量浓度为0.5g/L；/n步骤S3所述的第一次补加在发酵2-3d时，所述的第二次补加在发酵4-7d时，所述的第三次补加在发酵8-9d时；/n步骤S4所述的碱液为质量分数为30％的NaOH溶液，调节pH至8-10；/n步骤S7中所述的提取剂是体积比为3:1的乙酸乙酯与乙醇混合液。/n