[发明专利]通用型猪流行性腹泻病毒和猪丁型冠状病毒的双重巢式RT-PCR引物及检测方法与应用有效
申请号: | 201910071663.5 | 申请日: | 2019-01-25 |
公开(公告)号: | CN109868331B | 公开(公告)日: | 2021-06-22 |
发明(设计)人: | 刘国平;常小云;刘艳珍;刘梦杰;胡利群;曾攀 | 申请(专利权)人: | 长江大学 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6848;C12N15/11;C12R1/93 |
代理公司: | 武汉河山金堂专利事务所(普通合伙) 42212 | 代理人: | 胡清堂 |
地址: | 434023 *** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | 本发明提供了检测猪流行性腹泻病毒和猪丁型冠状病毒的双重巢氏RT‑PCR引物、检测方法及试剂盒。所述双重巢氏RT‑PCR引物是根据猪流行性腹泻病毒和猪丁型冠状病毒基因组的高度保守的N蛋白序列设计的四对引物。所述检测方法包括:提取样本RNA;以所得样本RNA为模板,利用所述引物进行双重巢式RT‑PCR反应;反应产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。本发明提供的技术方案可同时检测临床样本感染猪流行性腹泻病毒和猪丁型冠状病毒的情况,方便可靠、特异性强、灵敏度高、抗干扰性能好,而且与现有的核酸杂交、基因芯片等检测方法相比成本较低,检测周期短,实用性强。 | ||
搜索关键词: | 通用型 流行性 腹泻 病毒 猪丁型 冠状病毒 双重 rt pcr 引物 检测 方法 应用 | ||
【主权项】:
1.通用型猪流行性腹泻病毒和猪丁型冠状病毒的双重巢式RT‑PCR引物,其特征在于:所述引物根据猪流行性腹泻病毒和猪丁型冠状病毒N基因中碱基序列设计四对特异性引物,分别为猪流行性腹泻的外侧引物PEDV‑O和内侧引物PEDV‑I;猪丁型冠状病毒的外侧引物PDCoV‑O和内侧引物PDCoV‑I,具体为:PEDV‑O‑F:GCAAACGGGTGCCATTATCTCPEDV‑O‑R:GCTCACGAACAGCCACATTACPEDV‑I‑F:TTGGCATTTCTACTACCTCGGAACAPEDV‑I‑R:GCCTGACGCATCAACACCTTTPDCoV‑O‑F:CAGGTCCCAGAGGAAATCTTAPDCoV‑O‑R:TTTGGTAGGTGGCTCATAGGTPDCoV‑I‑F:TGCCAAACGCAACCCPDCoV‑I‑R:CAGCCATACCCGTCTTCT
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