[发明专利]一套快速定性、定量检测六种肠道微生物的引物组及其应用

摘要

本发明公开了一套快速定性、定量检测六种常见肠道微生物的引物组，由分别用于检测拟杆菌属、乳杆菌科、大肠杆菌、肠球菌属、链球菌属和双歧杆菌属的六组特异性引物对组成。应用此引物组进行PCR检测结合琼脂糖凝胶电泳可对样品进行定量分析；应用此引物组进行荧光定量PCR检测可对样品进行定量检测。本发明设计的引物组可在同一PCR反应程序下进行，四小时内实现对肠道中六种常见微生物进行定性、定量检测，在医疗检测和食品卫生等领域应用前景广阔。

主权项

1.一套快速定性、定量检测六种常见肠道微生物的引物组，由分别用于检测拟杆菌属、乳杆菌科、大肠杆菌、肠球菌属、链球菌属和双歧杆菌属的六组特异性引物对组成；其特征在于：所述用于拟杆菌属检测的引物对是上游引物Bacter F5与下游引物Bacter R6，该对引物扩增获得135bp拟杆菌基因组DNA片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；其中，所述上游引物Bacter F5与下游引物Bacter R6的核苷酸序列为：上游引物Bacter F5：5’‑AAGACAACGATGGATAGGGGTT‑3’，下游引物Bacter R6：5’‑TTCACGCTACTTGGCTGGT‑3’；所述用于乳杆菌科检测的引物对是上游引物Lacter F5与下游引物Lacter R6，该对引物扩增获得322bp乳杆菌基因组DNA片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；其中，所述上游引物Lacter F5与下游引物Lacter R6的核苷酸序列为：上游引物Lacter F5：5’‑ACAATGGACGCAAGTCTGATG‑3’，下游引物Lacter R6：5’‑ACCGCTACACATGGAGTTCCACWGT‑3’；所述用于大肠杆菌检测的引物对是上游引物E.coli F3与下游引物E.coli R4，该对引物扩增获得416bp大肠杆菌基因组DNA片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；其中，所述上游引物E.coli F3与下游引物E.coli R4的核苷酸序列为：上游引物E.coli F3：5’‑GAACGGTAACAGGAAGCAG‑3’，下游引物E.coli R4：5’‑ATGAACAAAGGTATTAACTTTACT‑3’；所述用于肠球菌属检测的引物对是上游引物Enter F3与下游引物Enter R4，该对引物扩增获得180bp肠球菌基因组DNA片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；其中，所述上游引物Enter F3与下游引物Enter R4的核苷酸序列为：上游引物Enter F3：5’‑CTTTCGGGTGTCGCTGAT‑3’，下游引物Enter R4：5’‑AGACTTTCGTCCATTGCC‑3’；所述用于链球菌属检测的引物对是上游引物Strep R4与下游引物Strep R3，该对引物扩增获得267bp链球菌基因组DNA片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；其中，所述上游引物Strep R4与下游引物Strep R3的核苷酸序列为：上游引物Strep F4：5’‑ACAAGATGGACCTGCGTT‑3’，下游引物Strep R3：5’‑TTACCGTCACTGTGTGAACTT‑3’；所述用于双歧杆菌属检测的引物对是上游引物Bifi F3与下游引物Bifi R4，该对引物扩增获得154bp双歧杆菌基因组DNA片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；其中，所述上游引物Bifi F3与下游引物Bifi R4的核苷酸序列为：上游引物Bifi F3：5’‑GTCCGGTGTGAAAGTCCATC‑3’，下游引物Bifi R4：5’‑GTAACGGCCCAGAGACCT‑3’。