[发明专利]太湖水体与沉积物中耐药基因的定量检测方法在审
| 申请号： | 201910082173.5 | 申请日： | 2019-01-28 |
| 公开（公告）号： | CN109652512A | 公开（公告）日： | 2019-04-19 |
| 发明（设计）人： | 薛校风;邢鹏;周丽君 | 申请（专利权）人： | 南京师范大学;中国科学院南京地理与湖泊研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 江苏致邦律师事务所 32230 | 代理人： | 徐蓓;尹妍 |
| 地址： | 210023 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及太湖水体与沉积物中耐药基因的定量检测方法，包括水体和沉积物样本采集、样本总基因组DNA提取、目标DNA标准品制备及荧光定量PCR检测，其中，所述耐药基因为磺胺类耐药菌中抗性基因sul2和四环素类耐药菌中抗性基因tetO。本发明通过荧光定量PCR技术对太湖水体和沉积物中磺胺类和四环素类抗生素的耐药基因进行了绝对定量检测，可辅助了解湖泊等自然水体和沉积物中四环素类和磺胺类耐药基因的含量水平和时空分布特征。 | ||
| 搜索关键词： | 沉积物 耐药基因 定量检测 水体 磺胺类 抗性基因 四环素类 耐药菌 荧光定量PCR检测 四环素类抗生素 荧光定量PCR 总基因组DNA 含量水平 时空分布 样本采集 自然水体 目标DNA 标准品 药基 制备 样本 湖泊 | ||
【主权项】：
1.一种太湖水体与沉积物中耐药基因的定量检测方法，包括采集水体和沉积物样本、样本总DNA提取、目标DNA标准品制备及荧光定量PCR检测，其特征在于，所述耐药基因为磺胺类耐药菌中抗性基因sul2和四环素类耐药菌中抗性基因tetO；所述荧光定量PCR反应体系为：![]()
Premix ExTaq Ⅱ 10μL；浓度为10μM的上游引物0.3μL；浓度为10μM的下游引物0.3μL；ROX Reference Dye Ⅱ 0.4μL；ddH2O 7μL；反应程序为：预变性：95℃30s；变性：95℃30s，退火：62℃(sul2)/55℃(tetO)30s，延伸：72℃，30s，40个循环。
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