[发明专利]一种制备雌雄均高度不育的鳞翅目昆虫的方法及其核酸构建物有效
| 申请号： | 201910084601.8 | 申请日： | 2019-01-29 |
| 公开（公告）号： | CN110184296B | 公开（公告）日： | 2023-06-09 |
| 发明（设计）人： | 黄勇平;张帆;陈凯;李芝倩;谭安江 | 申请（专利权）人： | 上海大学;中国科学院上海生命科学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/04 |
| 代理公司： | 上海恒慧知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 31317 | 代理人： | 张宁展 |
| 地址： | 200444*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种制备雌雄均高度不育的鳞翅目昆虫的方法及其核酸构建物。该方法包括：1)构建Vasa基因敲除核酸构建物，其包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件：U6启动子，第一Vasa基因靶点和polyA；U6启动子，第二Vasa基因靶点和polyA；2)将所述构建物和可表达Piggybac转座酶的PHA3PIG质粒共转鳞翅目新鲜昆虫卵，得G0代，自交得G1代；和，3)将所述G1代与表达Cas9蛋白的转基因鳞翅目昆虫交配得G2代，即得。本发明利用基于PiggyBac转座子的CRISPR/Cas9技术成功构建了在不影响正常交配行为的前提下高度不育的鳞翅目昆虫，在鳞翅目害虫通过不育技术进行防治方面具有重要的价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 制备 雌雄 高度 不育 鳞翅目 昆虫 方法 及其 核酸 构建 | ||
【主权项】：
1.一种制备雌雄高度不育的鳞翅目昆虫的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)构建Vasa基因敲除核酸构建物，其包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件：第一sgRNA表达元件和第二sgRNA表达元件；所述的第一sgRNA表达元件包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件：U6启动子，第一Vasa基因靶点和polyA；所述的第二sgRNA表达元件包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件：U6启动子，第二Vasa基因靶点和polyA；2)将步骤1)所述的Vasa基因敲除核酸构建物和可表达Piggybac转座酶的PHA3PIG质粒共转鳞翅目新鲜昆虫卵，孵化，化蛾，得G0代，使G0代自交，获得G1代；和3)将步骤2)所述的G1代与表达Cas9蛋白的转基因鳞翅目昆虫交配，获得的G2代，即得雌雄高度不育的鳞翅目昆虫。
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