[发明专利]一种三七毛状根的扩大培养以及三七皂苷的积累方法

摘要

本发明提供了一种三七毛状根的扩大培养以及三七皂苷的积累方法，该方法包括如下步骤：（1）毛状根的活化；（2）一级摇瓶培养；（3）二级摇瓶培养；（4）低温胁迫和等离子体辐照处理；（5）生物反应器培养。本发明通过对影响三七毛状根生长和次生代谢产物积累的主要因素的研究，摸索出了三七毛状根扩大培养的最优条件；通过对三七毛状根种子进行低温胁迫处理和等离子体辐照处理，并结合特定的培养基，达到促进三七毛状根生长和代谢，从而提高三七皂苷含量的目的，为三七毛状根的规模化生产以及三七皂苷的获得提供新途径。

主权项

1.一种三七毛状根的扩大培养以及三七皂苷的积累方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（1）毛状根的活化将继代保存的三七毛状根接种到添加酵母提取物1.0g/L、葡萄糖20g/L的1/2MS液体培养基中，置于温度24‑26℃、转速70‑90r/min的摇床上避光培养6‑8d；（2）一级摇瓶培养将活化后的三七毛状根在无菌条件下用解剖刀切碎至2‑3mm，在装有种子培养基的500mL三角瓶中，按2.5%的接种量接入切碎的毛状根，置于温度24‑26℃、转速90‑110r/min的摇床上避光培养14‑18d，获得毛状根一级种子；（3）二级摇瓶培养在装有种子培养基的1L三角瓶中，按5.0%的接种量接入毛状根一级种子，置于24‑26℃、转速90‑110r/min的摇床上避光培养14‑18d，获得毛状根二级种子；（4）低温胁迫和等离子体辐照处理将毛状根二级种子先放入5℃冰箱中低温胁迫处理1‑2d，取出后再进行常压室温等离子体辐照处理45min；（5）生物反应器培养采用气升环流式生物反应器，向反应器中装入50‑60%体积的毛状根培养基，采用原位高压蒸汽灭菌法进行灭菌，当反应器中的培养基冷却至室温后，用火焰接种法将经过处理的毛状根二级种子接入反应器中开始培养，培养18‑22d后，利用装设于反应器的滤网过滤放出部分体积的培养液，并补加相同体积的新鲜毛状根培养基，继续培养23‑25d后结束培养，培养过程中温度控制在24‑26℃，通气量控制在0.05‑0.07VVM。