[发明专利]一种重组乳酸乳球菌菌株及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种重组乳酸乳球菌菌株及其制备方法和应用，通过过表达murF基因得到重组乳酸乳球菌菌株。构建菌株的方法：将乳酸乳球菌菌株的基因murF连接到质粒载体上，获得重组质粒；将重组质粒电转到乳酸乳球菌中，选取阳性转化子，获得重组菌株。重组乳酸乳球菌菌株可提高菌株的耐酸性和乳酸链球菌素(Nisin)产量。将原始菌株和过表达murF的菌株在发酵培养基中发酵12h，培养到8h时Nisin产量达到最大，过表达murF的菌株比原始菌株Nisin产量提高1.1～1.5倍，酸应激存活率提高1.1～1.7倍。本发明的重组菌株对产物Nisin和菌株抗逆性有明显的影响。其中Nisin是一种安全无毒的食品防腐剂。

主权项

1.一种重组乳酸乳球菌菌株，其特征在于，所述重组菌株采用酶切连接的方法将目的基因表达在乳酸乳球菌中过表达，构建方法包括如下步骤：(1)提取乳酸乳球菌的基因组DNA，以该基因组DNA为模板，设计引物扩增出murF基因片段；(2)限制性内切酶对步骤(1)中的murF片段进行双酶切；(3)同步骤(2)用限制性内切酶对质粒pLEB124进行双酶切，得到线性质粒；(4)将步骤(2)的酶切片段和步骤(3)的酶切质粒通过T4连接酶进行连接；(5)将步骤(4)得到的重组质粒化转到大肠杆菌TG1中，用红霉素抗性筛选得到阳性转化子，挑取单菌落进行PCR验证并测序，将正确的重组单菌落37℃培养克隆质粒；(6)将步骤(5)得到的重组质粒电转到乳酸乳球菌YF11中，用红霉素抗性筛选得到阳性菌株，挑取单菌落PCR验证，将验证正确的菌株保菌，‑80℃储存菌种。