[发明专利]一种耳聋相关基因文库的构建方法和应用在审
| 申请号： | 201910093256.4 | 申请日： | 2019-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN109763174A | 公开（公告）日： | 2019-05-17 |
| 发明（设计）人： | 管敏鑫;蒋萍萍;冀延春;郑静 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 赵杭丽 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供一种耳聋相关基因文库的构建方法，针对耳聋相关致病基因每个编码序列，由5’往3’方向，按序列反向互补原则设计探针序列，在每个探针序列的连接接头，采用寡核苷酸原位合成技术，在芯片上进行寡核苷酸的大规模合成；用氨水将芯片上的寡核苷酸洗脱形成寡核苷酸混合物；通过PCR的方法，采用5’端带有生物素标记的引物，形成带生物素标记的耳聋相关致病基因DNA探针文库。本发明实现了对耳聋相关的已知位点的高通量筛查方法，较单独进行位点筛查和全基因组或者全外显子测序的检测更快速、经济、简便，且对设备及环境要求低，利于推广和应用，适用于耳聋相关人群的筛查和预防性检查。可在检测线粒体DNA的SNP位点中的应用。 | ||
| 搜索关键词： | 耳聋 寡核苷酸 筛查 文库 生物素标记 探针序列 相关基因 致病基因 构建 位点 寡核苷酸混合物 芯片 应用 原位合成技术 氨水 大规模合成 外显子测序 预防性检查 线粒体DNA 编码序列 反向互补 环境要求 连接接头 全基因组 对设备 高通量 检测 洗脱 引物 人群 | ||
【主权项】：
1.一种耳聋相关基因文库的构建方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)针对所述基因的编码序列，由5’往3’方向，按照序列反向互补的原则，从第一个碱基开始设计长度为90bp的探针序列，并且每两个相邻的探针序列之间存在重叠，所述每两个相邻的探针序列之间重叠是所述探针长度的1/2或2/3，共计246个基因；(2)在每个探针序列的5’端和3’端，分别添加如SEQ:NO.1和SEQ:NO.2所示序列，形成两端带有接头序列；(3)采用寡核苷酸原位合成技术，在芯片上进行寡核苷酸的大规模合成上述探针序列，将芯片上的寡核苷酸洗脱下来，形成寡核苷酸混合物；(4)通过多重PCR接头连接的方法，采用5’端均带有生物素标记的正向引物TTAGATAGGTGTGTAGGCGC和反向引物TAAGGTGCGTACTAGCTGAC，对寡核苷酸混合物进行扩增，形成带生物素标记的基因DNA探针文库。
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