[发明专利]一种桦褐孔菌多糖的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种桦褐孔菌多糖的制备方法，利用水提醇沉、反复冻融、脱蛋白、透析、冷冻干燥、亲和色谱等方法，从桦褐孔菌中分离纯化出具有抗氧化、抗衰老功能的多糖组分；桦褐孔菌多糖组分具有强的抗氧化活性；桦褐孔菌多糖预处理可抑制依托泊苷诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖抑制和凋亡，抑制依托泊苷引起的细胞衰老β‑半乳糖苷酶活性水平增加、衰老相关异染色质聚集和线粒体膜电位下降；桦褐孔菌多糖预处理可抑制依托泊苷诱导的p53、p21、p16蛋白和mRNA表达水平升高。通过本发明方法制备的桦褐孔菌多糖组分具有良好的抗氧化、抗衰老活性，作为新型抗衰老保护药物有着广阔的应用前景。

主权项

1.一种桦褐孔菌多糖的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)将干燥的桦褐孔菌粉碎，过筛；(2)将步骤(1)粉碎过筛的桦褐孔菌粉末用80％乙醇回流脱脂18～24h，残渣利用水提醇沉法提取多糖，反复冻融，酶‑Sevag联合法脱蛋白，截留分子量3500Da透析去除小分子物质，在‑45～‑55℃及真空度5～100Pa下冷冻干燥得到粗多糖；(3)将步骤(2)获得的粗多糖用蒸馏水复溶成5％的糖溶液，过滤后上样到DEAE‑cellulose柱，用0→1mol/L NaCl梯度洗脱，收集洗脱液，苯酚‑硫酸法测定多糖含量，得到两种主要多糖组分；(4)室温流水透析步骤(3)得到的两种主要多糖组分，分别采用Sepharose CL‑6B柱层析进一步纯化，0.15mol/L NaCl洗脱，室温流水透析18～24h，在‑45～‑55℃及真空度5～100Pa下冷冻干燥，得到分子量均一的桦褐孔菌不同多糖组分。