[发明专利]结合激光技术在不含渗透性保护剂下的冷冻样本处理方法在审
| 申请号： | 201910096914.5 | 申请日： | 2019-01-31 |
| 公开（公告）号： | CN109644991A | 公开（公告）日： | 2019-04-19 |
| 发明（设计）人： | 金波;刘湘娟 | 申请（专利权）人： | 力盟低温医学（深圳）有限公司 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02;C12N5/073;C12N5/075 |
| 代理公司： | 深圳市汉唐知识产权代理有限公司 44399 | 代理人： | 刘志海 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市坪*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了结合激光技术在不含渗透性保护剂下的冷冻样本处理方法。它包括S1、细胞样本冷冻：从细胞缓冲液中取出细胞样本后浸置于冷冻液中，然后将包含有细胞样本的冷冻液的液滴转移至玻璃化冷冻载杆上，最后直接将玻璃化冷冻载杆浸入液氮中进行冷冻保存；按质量摩尔浓度计，冷冻液由蔗糖溶液、盐溶液、聚蔗糖溶液、纳米碳粒混合而成；S2、利用激光脉冲向液滴施加热量；S3、将解冻后的细胞样本置于解冻液中进行洗涤。本发明利用低浓度的非渗透性蔗糖成分来处理生物样本，使其脱水后即可直接放置于液氮中进行冷冻保存；同时，在激光复温技术的配合下，在短时间内对生物样本的超快速解冻处理，极大地提高了生物样本的成活率以及发育潜能。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞样本 生物样本 冷冻液 冷冻 渗透性保护剂 玻璃化冷冻 激光技术 冷冻保存 样本处理 液氮 液滴 载杆 浸入 发育潜能 非渗透性 激光脉冲 快速解冻 纳米碳粒 蔗糖溶液 直接放置 蔗糖 缓冲液 解冻液 聚蔗糖 浓度计 盐溶液 复温 脱水 成活率 解冻 洗涤 激光 取出 施加 细胞 配合 | ||
【主权项】：
1.结合激光技术在不含渗透性保护剂下的冷冻样本处理方法，其特征在于：它包括以下步骤：S1、细胞样本冷冻：从细胞缓冲液中取出细胞样本后，浸置于冷冻液中并保持静浸状态至少2.0min，然后将包含有细胞样本的冷冻液的液滴转移至玻璃化冷冻载杆上并将液滴的大小控制在3μL以内，最后直接将玻璃化冷冻载杆浸入液氮中进行冷冻保存；其中按质量摩尔浓度计，冷冻液以由1.0mol/kg蔗糖溶液、0.15mol/kg盐溶液和0.0062mol/kg聚蔗糖溶液混合而成的溶液为基础液经添加0.4μg/ml的纳米碳粒配置而成；S2、细胞样本解冻：将玻璃化冷冻载杆从液氮中取出后，利用激光脉冲向液滴施加热量，使液滴在吸收激光热量后率先解冻并同时将热量传递给液滴内的细胞样本以最终实现细胞样本的解冻；S3、冷冻液成分去除：将解冻后的细胞样本置于解冻液中进行洗涤，去除细胞样本上的冷冻液成分；S4、细胞样本培养：将解冻后的细胞样本转移至二氧化碳培养箱中进行培养。
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