[发明专利]一种高效液相色谱串联质谱法检测蚯蚓体内CYP1A2和CYP3A4酶活力的方法在审
| 申请号： | 201910104304.5 | 申请日： | 2019-02-01 |
| 公开（公告）号： | CN109596752A | 公开（公告）日： | 2019-04-09 |
| 发明（设计）人： | 杨晓霞;杨俊英;龚久平;李典晏;张雪梅;张伟;孟霞;李必全;柴勇;刘剑飞 | 申请（专利权）人： | 重庆市农业科学院 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 401329 重*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种高效液相色谱串联质谱法检测蚯蚓体内CYP1A2和CYP3A4酶活力的方法，属于酶活力检测技术领域，该方法具体包括如下步骤：(1)制备蚯蚓微粒体蛋白悬浮液；(2)将步骤(1)中制得的蚯蚓微粒体蛋白悬浮液加入含有两种特异探针底物的孵育体系中，升温启动酶促反应，待酶促反应终止后，利用高效液相色谱串联质谱联用仪检测经酶促反应终止后产生的两种特异代谢产物，并分别计算CYP1A2和CYP3A4酶活力。该检测方法准确度、精确度及灵敏度高，稳定性强，可用于同时测定蚯蚓体内多个CYP亚酶活力，进而为探索蚯蚓不同CYP亚酶对土壤污染物的响应模式提供了检测方法。 | ||
| 搜索关键词： | 蚯蚓 酶促反应 检测 高效液相色谱串联质谱法 微粒体蛋白 体内 悬浮液 高效液相色谱 酶活力检测 土壤污染物 准确度 串联质谱 代谢产物 孵育体系 特异探针 稳定性强 响应模式 联用仪 灵敏度 酶活力 底物 可用 制备 探索 | ||
【主权项】：
1.一种高效液相色谱串联质谱法检测蚯蚓体内CYP1A2和CYP3A4酶活力的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)制备蚯蚓微粒体蛋白悬浮液；(2)将步骤(1)中制得的蚯蚓微粒体蛋白悬浮液加入含有两种特异探针底物的孵育体系中，升温启动酶促反应，待酶促反应终止后，利用高效液相色谱串联质谱联用仪检测经酶促反应终止后产生的两种特异代谢产物，并分别计算CYP1A2和CYP3A4酶活力。
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