[发明专利]一种甘蔗白叶病植原体不同亚组的PCR-RFLP鉴别方法有效
| 申请号： | 201910106318.0 | 申请日： | 2019-02-02 |
| 公开（公告）号： | CN109652503B | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 张荣跃;黄应昆;李文凤;李婕;单红丽;王晓燕;仓晓燕;罗志明;尹炯 | 申请（专利权）人： | 云南省农业科学院甘蔗研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/683 | 分类号： | C12Q1/683;C12Q1/686;C12Q1/689;C12N15/11 |
| 代理公司： | 53207 云南凌云律师事务所 | 代理人： | 康珉<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 661699 云南省红河*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种甘蔗白叶病植原体不同亚组的PCR‑RFLP鉴别方法。以甘蔗白叶病植原体tuf基因为对象设计特异性引物，通过PCR扩增得到tuf基因片段，然后采用限制性核酸内切酶Msp I对扩增得到的tuf基因片段进行酶切，通过差异性的RFLP酶切图谱对甘蔗白叶病植原体进行不同亚组的区分。本发明无需测序即可快速、准确、高效的鉴别甘蔗白叶病植原体16SrXI‑B亚组和甘蔗白叶病植原体16SrXI‑D亚组，对甘蔗白叶病的病原鉴定和防控具有重要意义。 | ||
| 搜索关键词： | 植原体 甘蔗 亚组 鉴别 限制性核酸内切酶 特异性引物 病原鉴定 对象设计 酶切图谱 重要意义 差异性 测序 扩增 酶切 | ||
【主权项】：
1.一种甘蔗白叶病植原体不同亚组的PCR-RFLP鉴别方法，其特征在于，包括下述步骤：/n（1）以待鉴别甘蔗材料的基因组DNA为模板，采用tuf基因特异性引物进行PCR扩增，所述tuf基因特异性引物由tuf-F引物和tuf-R引物组成，tuf-F引物的核苷酸序列如SEQ IDNO：1所示，tuf-R引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；/n（2）使用限制性核酸内切酶Msp I对步骤（1）的PCR扩增产物酶切；/n（3）结果判别，取酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，酶切电泳图谱显示被Msp I酶切为两条带，一条为124bp，另一条为344bp的待鉴别甘蔗材料病原为甘蔗白叶病植原体16SrXI-B亚组；没有被酶切的只有1条468bp大小条带的待鉴别甘蔗材料病原为甘蔗白叶病植原体16SrXI-D亚组。/n
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