[发明专利]一种全基因组高通量克隆载体的构建有效
申请号: | 201910109486.5 | 申请日: | 2019-02-05 |
公开(公告)号: | CN109868287B | 公开(公告)日: | 2021-04-23 |
发明(设计)人: | 翁炳焕;黄荷凤;马端 | 申请(专利权)人: | 翁炳焕 |
主分类号: | C12N15/867 | 分类号: | C12N15/867;C12N15/65;C12N5/10 |
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地址: | 317300 浙江省台*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | 一种用于生物医学领域的全基因组高通量克隆载体的构建,其特征在于,构建含hTERT和SV40LT的逆转录病毒载体,转染PT67包装细胞,以G418和PM联合筛选获得质粒包装PT67细胞,提取其培养液,转染sp2/0细胞,再以G418和PM联合筛选获得高度永生化的质粒包装sp2/0细胞,能在植入外源性全基因组后经HAT、G418和PM联合筛选而获得可冻存和扩增全基因组的高度永生化的杂交株,用于罕见病全基因组的产业制备及其永生基因库的构建。 | ||
搜索关键词: | 一种 基因组 通量 克隆 载体 构建 | ||
【主权项】:
1.一种全基因组高通量克隆载体的构建,其特征在于,构建含SV40LT、hTERT和抗生素抗性基因的逆转录病毒重组载体,将该重组载体转染PT67包装细胞以制备转染质粒,继之将该质粒转染sp2/0细胞,使sp2/0细胞获得高度永生化和抗生素抗性的性能,从而更适合于在体外无限传代并带动被植入的外源基因的扩增,以作为全基因组高通量克隆载体用于罕见病全基因组的植入、产业制备和收藏。
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