[发明专利]一种利用ATP生物发光反应检测食品中肉毒杆菌的方法

摘要

本发明公开了一种利用ATP生物发光反应检测食品中肉毒杆菌的方法，该方法首先将待检测的样品与PBS缓冲液混合后离心得到初始上清液，随后加入消化液进行水浴加热反应，再次离心后得到消化上清液并抽滤，将滤膜浸入ATP释放液中振荡提取，得到ATP提取液，接着将制备得到的发光反应液与ATP提取液在发光反应管中混合，置于ATP荧光检测仪中检测发光强度，从而实现对食品中肉毒杆菌的快速检测。本发明所述的利用ATP生物发光反应检测食品中肉毒杆菌的方法简便快速、灵敏度高，能够准确检测出食品中是否含有肉毒杆菌及相对含量，极大地促进了食品安全检测技术的提高。

主权项

1.一种利用ATP生物发光反应检测食品中肉毒杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将50 g的待检测的固态/液态样品与950 g的1×PBS缓冲液混合，经研磨/搅拌得到悬浮液/混合液，离心除去不溶物，向得到的初始上清液中加入200 μL消化液，混匀后放入40度水浴锅中进行消化反应15～20 min，然后以3000 g离心1～2 min，弃沉淀后得到消化上清液；（2）取100 mL步骤（1）得到的消化上清液进行抽滤，随后将滤膜浸入到盛放有50 mL ATP释放液的烧杯中，所述ATP释放液包括Triton X‑100、三甲基氨基甲烷、盐酸胍、N‑2‑羟乙基哌嗪‑N’‑2‑乙磺酸钠盐、三(2‑羧乙基)膦、葡萄糖，随后加入15 μL三磷酸腺苷双磷酸酶，将烧杯转移至40℃水浴锅中速率振荡提取，得到ATP提取液；（3）在无菌环境中将荧光素酶10μL、可溶性无机镁盐30 mg、二硫苏糖醇15 mg与50 mL无菌水混合，振荡混匀，得到发光反应液；（4）吸取0.2 mL步骤（2）得到的ATP提取液于发光反应管中，加入pH 7.0～9.0的含0.13～0.15 mol/L NaCl、0.02～0.03 mol/L EDTA、0.06～0.08 mol/L环糊精的Tris‑HCl缓冲液将总体积补足至0.9 mL，再加入0.1 mL步骤（3）的发光反应液，充分振荡后将混合液置于ATP荧光检测仪中检测发光强度，检测响应时间为20～30 s。