[发明专利]一种用模块化设计构建双系统表达质粒文库的方法

摘要

本发明公开了一种用模块化设计构建双系统表达质粒文库的方法；是用已有cDNA或ORF质粒文库通过模块化设计构建双系统表达质粒(类UAS‑cDNA/ORF)文库的方法。具体包括：用基因编辑技术切割已有cDNA或ORF基因文库质粒的cDNA或ORF上游载体序列，使其线性化；制备模块化插入序列片段，该序列包含类酵母UAS、果蝇核心启动子及抗生素抗性基因；运用无缝克隆技术将所述模块化插入序列片段与所述线性化质粒连接，转化大肠杆菌制备类UAS‑cDNA/ORF文库质粒。本发明由于引入了模块化设计理念，较现有技术具有简单、适用范围广、适合大容量文库构建、高效、经济的优点。

主权项

1.一种用模块化设计构建双系统表达质粒文库的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、利用基因编辑技术切割已有cDNA或ORF质粒文库的质粒cDNA或ORF的5’端上游的载体序列，使其线性化，得到原质粒文库的线性化质粒；S2、设计并构建模块化插入序列质粒，该模块化插入序列包含类酵母UAS序列、果蝇核心启动子序列、转基因果蝇筛选标记基因、用于把转基因定点插入到果蝇基因组特定位点的定点整合序列、与原cDNA或ORF质粒所不同的抗生素抗性基因序列；该序列两端与步骤S1的原质粒文库的线性化质粒末端序列重叠；将模块化插入序列从所述模块化插入序列质粒上切下，电泳分离回收，得到模块化插入序列片段；S3、运用无缝克隆技术将步骤S2回收的模块化插入序列片段与步骤S1的原质粒文库的线性化质粒连接，然后转化大肠杆菌，在同时含有模块化插入序列抗性和原质粒文库的质粒抗性的对应的抗生素的LB固体平板上培养，再从平板上挑取克隆后过夜培养，提取质粒并鉴定即得到类UAS‑cDNA/ORF文库质粒。