[发明专利]包含UTR的双荧光报告基因系统、鉴定sRNA-UTR相互作用的方法在审
| 申请号： | 201910114652.0 | 申请日： | 2019-02-14 |
| 公开（公告）号： | CN109777862A | 公开（公告）日： | 2019-05-21 |
| 发明（设计）人： | 杨世辉;杨永富;李闰霞;马立新 | 申请（专利权）人： | 湖北大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 杨采良 |
| 地址： | 430062 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于生物信息学和基因工程技术领域，公开了一种包含UTR的双荧光报告基因系统、鉴定sRNA‑UTR相互作用的方法，确定5’UTR序列；获取靶UTR序列；获取双荧光报告基因系统骨架；构建含UTR的双荧光报告基因系统；将质粒电转到野生型运动发酵单胞菌及对应sRNA敲除或过表达菌株中，通过PCR及测序确定最终菌株；用流式细胞术分析相互作用关系，进行荧光强度定量分析。本发明操作十分简单；能快速确定sRNA与靶UTR之间是否存在相互作用关系，便于批量操作利用的双荧光报告基因系统可用于定量分析相互作用的强度，也可以移植到除运动发酵单胞菌以外其他物种中使用。 | ||
| 搜索关键词： | 荧光报告基因 运动发酵单胞菌 定量分析 流式细胞术分析 基因工程技术 生物信息学 表达菌株 快速确定 批量操作 野生型 荧光 测序 电转 构建 菌株 可用 敲除 质粒 物种 移植 | ||
【主权项】：
1.一种鉴定sRNA‑UTR相互作用的方法，其特征在于，所述鉴定sRNA‑UTR相互作用的方法包括：第一步，利用生物信息学方法对靶序列进行分析，确定转录起始位点；第二步，以Z.mobilis基因组为模板，利用上下游引物对扩增得到靶UTR序列，按照PCR回收试剂盒对PCR产物回收纯化；第三步，以含Pgap的双荧光报告基因系统为模板，从Pgap启动的转录起始位点和EGFP为两端起始反向扩增得到骨架，按照PCR回收试剂盒对PCR产物回收纯化；第四步，利用Gibson装配，将靶UTR和双荧光报告基因系统骨架连接，得到含靶UTR的双荧光报告基因系统；第五步，得到质粒后，将质粒电转到野生型运动发酵单胞菌及对应sRNA敲除或过表达菌株中，通过PCR及测序确定最终菌株；第六步，用流式细胞术进行相互作用关系的分析，并进行荧光强度的定量分析。
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