[发明专利]利用HTRF一步法筛选Bcl-2家族成员之间结合的阻断剂的方法

摘要

本发明公开了一种利用HTRF一步法筛选Bcl‑2家族成员之间结合的阻断剂的方法，属于阻断剂筛选方法领域。利用HTRF一步法筛选Bcl‑2家族成员之间结合(如Mcl1/BAK)的阻断剂的方法，包括如下步骤：配置已构建好的带有不同标签的Mcl1及BAK蛋白，待筛选样品；在微孔板中依次加入待筛选样品Mcl1及BAK蛋白，上述两种对应的抗标签抗体，分别偶联Donor和Acceptor；室温孵育，用酶标仪读数检测荧光，665nm/620nm的比值为原始数据；本发明实现了生化水平上筛选Bcl‑2家族成员之间结合(如Mcl1/BAK)的阻断剂，无需构建细胞，更加直接快捷。

主权项

1.一种利用HTRF一步法筛选Bcl‑2家族成员之间结合的阻断剂的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤一，配置已构建好的带有不同标签的Mcl1及BAK蛋白，待筛选样品；步骤二，在微孔板中依次加入待筛选样品Mcl1及BAK蛋白，上述两种对应的抗标签抗体，分别偶联Donor和Acceptor；步骤三，室温孵育，用酶标仪读数检测荧光，665nm/620nm的比值为原始数据；其中上述偶联Donor和Acceptor的两种标签抗体分别检测相互作用的蛋白Mcl1和BAK，从而形成四个物质聚合的复合物，拉近Donor和Acceptor的距离，能量能够从Donor上转移到Acceptor上，使Acceptor产生荧光；若样品能抑制二者结合，则随着阻断剂浓度的增加，665nm/620nm的比值降低；待稳定后测定荧光值的变化便可量化阻断剂的效价IC50；检测的为HTRF两个荧光665nm和620nm，即时间分辨荧光，当665nm/620nm的比值越低，阻断剂的效应越高。