[发明专利]一种鹅血抗氧化小分子酶解物纳米脂质体的制备方法

摘要

本发明涉及一种鹅血抗氧化小分子酶解物纳米脂质体的制备方法，属鹅血副产物深加工技术领域。本发明以鹅血为原料，分离鹅血血红蛋白，然后利用碱性蛋白酶，通过工艺优化降解大分子蛋白质，富集具有抗氧化活性的多肽以及氨基酸，同时通过逐级分离得到小于1KD的小分子活性物质，然后利用磷脂、胆固醇和吐温80包埋小分子活性物质制得到纳米脂质体。该脂质体可以有效地防止外界环境对鹅血抗氧化小分子酶解物的破坏，提高其稳定性，同时提高了鹅血蛋白的消化吸收率，并使其活性成分在胃肠环境分步缓慢释放，充分发挥其生理功能。本发明降低了鹅血直接排放对环境产生的污染问题，使鹅血得到高附加值利用，并可进行工业化生产。

主权项

1.一种鹅血抗氧化小分子酶解物纳米脂质体的制备方法；其特征在于：它包括如下步骤：1）鹅血血红蛋白分离： 将新鲜鹅血进行离心分离，并用5倍体积的生理盐水洗涤下层分离物并收集，在收集的下层分离物中加入蒸馏水，定容至原鹅血体积； 将分离处理液进行超声细胞破碎，释放出细胞内的蛋白质，超声功率为250w，时间为12min；离心过滤：将超声破碎后的混合液进行离心分离然后过滤得到鹅血红蛋白；2）酶解处理：将前处理得到的鹅血血红蛋白用蒸馏水调整浓度至6%，pH值为10.0，然后在50℃下预热5min，然后添加6000U/g的碱性蛋白酶，在50℃条件下避光酶解5.0h，转速90r/min），之后100℃灭酶10分钟，离心取上清液即为鹅血酶解液；3）超滤分离：将鹅血酶解液依次通过10KD, 3KD，1KD的超滤离心分离，离心条件为5000g/30min，收集最终组分得到鹅血抗氧化小分子酶解物备用，同时分析其抗氧化能力；4）纳米脂质体的制备： 取磷脂1g，胆固醇0.125g，加乙醚30ml溶解，得到有机相；鹅血抗氧化小分子酶解物1.5 mL加8.5mL PBS水得到内水相；将内水相与有机相混合均匀， 超声冰浴处理5min，功率为400w； 将超声处理后的混合液快速倒入旋转蒸发仪样品室进行蒸发浓缩，水浴温度为35℃，真空度为0.005MPa, 待旋转蒸发仪壁上形成一层膜后，将吐温80 0.5g与外水相20ml混合 加到旋转蒸发仪样品室，将真空度提高到0.01MPa旋转溶解，待旋转蒸发仪样品室壁上的膜都溶于PBS时收集溶液； 均质处理：将收集到的溶液均质处理2次，均质压力为30 MPa，时间10 s；得到的即为鹅血抗氧化小分子酶解物纳米脂质体。