[发明专利]一种牙髓干细胞分离及培养方法

摘要

本发明公开了一种牙髓干细胞分离及培养方法，包括以下步骤：牙髓组织的分离、用质量体积浓度均为0.05‑0.5％的Ⅳ型胶原酶、Ⅴ型胶原酶和胰酶的混合酶对牙髓组织进行酶解、牙髓干细胞原代培养、在培养基中添加细胞生长因子、谷氨酰胺、复合维生素、胰岛素、银耳多糖、川党参提取物、铁皮石斛提取物等多种营养成分。本发明具有以下优点：牙髓组织消化更彻底，获得的牙髓干细胞总数更多；增加了牙髓干细胞获得总数，提高了牙髓干细胞的细胞活率，同时缩短其传代时间，大大缩短了牙髓干细胞分离培养的周期。

主权项

1.一种牙髓干细胞分离及培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)从牙齿样本的髓腔中抽取牙髓，用缓冲液清洗；(2)向上述清洗后的牙髓组织中加入2‑35倍体积的混合酶，进行酶解；所述混合酶为质量体积浓度均为0.05‑0.5％的Ⅳ型胶原酶、Ⅴ型胶原酶和胰酶的混合液；37℃，酶解至牙髓组织完全消化不见后，离心去除上清液，得到酶解后的牙髓细胞；(3)向上述酶解后的牙髓细胞中加入磷酸缓冲液，吹打均匀后，过网筛，去除未消化完全的组织块，离心去除上清液，离心后的沉淀既是牙髓干细胞；(4)向上述离心后的沉淀中加入培养基，进行原代培养；所述培养基包括基础培养基和添加物，所述基础培养基为α‑MEM培养基；所述添加物包括细胞生长因子、谷氨酰胺、复合维生素、胰岛素、硫辛酸、丙二醇、氯化钠、银耳多糖、川党参提取物、铁皮石斛提取物。(5)待牙髓干细胞传代至2代，每2天换液一次，当细胞汇合度为85％～90％时，用胰酶进行消化。