[发明专利]一种豌豆蚜海藻糖酶基因的RNA干扰序列的制备方法及应用有效

专利信息
申请号: 201910160051.3 申请日: 2019-03-04
公开(公告)号: CN109852617B 公开(公告)日: 2023-04-28
发明(设计)人: 王广;张克信;张艳蕾;刘长仲 申请(专利权)人: 甘肃农业大学
主分类号: C12N15/113 分类号: C12N15/113;C12N15/10;A01N57/16;A01P7/04
代理公司: 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 代理人: 谈杰
地址: 730000 *** 国省代码: 甘肃;62
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摘要: 本申请公开了一种豌豆蚜海藻糖酶基因的RNA干扰序列的制备方法,包括以下步骤:①、根据豌豆蚜的海藻糖酶序列(XM_003245847.3)选取RNAi的靶标区域,并利用Primer5.0设计靶标区域的PCR扩增引物;②、提取豌豆蚜的总RNA并通过反转录过得cDNA,然后用扩增引物对cDNA中含有海藻糖酶基因进行PCR扩增,纯化产物获得目的基因;③、扩增含T7promoter序列的双链目的DNA,然后利用试剂盒合成双链RNA。
搜索关键词: 一种 豌豆 海藻 基因 rna 干扰 序列 制备 方法 应用
【主权项】:
1.一种豌豆蚜海藻糖酶基因的RNA干扰序列的制备方法,所述的方法包括以下步骤:①、根据豌豆蚜的海藻糖酶序列(XM_003245847.3)选取RNAi的靶标区域,并利用Pri mer5.0设计靶标区域的PCR扩增引物:正义链5’‑3’GGCGTGGTTTGACTGGGATA反义链5’‑3’CAACCAAAACCTGTCTGCGG;②、提取豌豆蚜的总RNA并通过反转录过得cDNA,然后用扩增引物对cDNA中含有海藻糖酶基因进行PCR扩增,纯化产物获得目的基因;③、对①中的特异性引物5’‑端加上T7 promoter序列:TRE‑1:TAATACGACTCACTATAGGGGGCGTGGTTTGACTGGGATATRE‑2:TAATACGACTCACTATAGGGCAACCAAAACCTGTCTGCGG,用于扩增含T7 pro moter序列的双链目的DNA,然后利用试剂盒合成双链RNA。
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