[发明专利]一种单条秀丽隐杆线虫转录组测序文库的构建方法及测序方法在审
| 申请号： | 201910161196.5 | 申请日： | 2019-03-04 |
| 公开（公告）号： | CN109881257A | 公开（公告）日： | 2019-06-14 |
| 发明（设计）人： | 周京花;徐素宏 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12Q1/6806;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 沈金龙 |
| 地址： | 310013 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种单条秀丽隐杆线虫转录组测序文库的构建方法及测序方法。测序文库在构建时第一步通过将单条秀丽隐杆线虫在加入裂解液的情况下进行研磨以使虫体裂解完全。本发明方法为了克服实验操作性难题，通过改进裂解液及裂解方法等相关裂解技术，改进单细胞文库构建体系，成功攻克了单条线虫裂解的技术难题，成功建立单条成年线虫转录组测序文库，并建立完善的实验技术流程，不仅为特殊处理线虫提供了强有力的技术支持，也为稀有线虫或特殊处理线虫转录组方面的研究提供了关键的技术保障。 | ||
| 搜索关键词： | 测序文库 单条 裂解 秀丽隐杆线虫 转录组 构建 处理线 裂解液 测序 线虫 转录 单条线虫 技术保障 技术难题 技术支持 实验技术 文库构建 研磨 虫体 改进 成功 研究 | ||
【主权项】：
1.一种单条秀丽隐杆线虫转录组测序文库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)挑取单条秀丽隐杆线虫，加入裂解液，并将虫体研磨裂解获得裂解产物；(2)以裂解产物为模板，逆转录合成cDNA；(3)以步骤(2)中cDNA为模板，二次扩增，增加cDNA浓度；(4)将步骤(3)产物纯化获得cDNA文库；(5)在纯化后的cDNA文库中加入转座酶将序列打断；(6)通过PCR方法在步骤(5)所得产物的各序列上加上测序接头，获得单条秀丽隐杆线虫转录组测序文库。
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