[发明专利]一种多子小瓜虫的传代培养方法

摘要

本发明公开了一种多子小瓜虫的传代培养方法，属于原代细胞培养技术领域。本发明简化了分离病鱼体表滋养体的方法，提高获得样本的效率；采用无菌曝气水和控温的方法优化了多子小瓜虫的培养条件，使得滋养体能在优良的环境中存活并在更短的时间内产生更多的掠食体；将掠食体和健康金鱼在高密度的条件下进行感染，增加了感染的几率以及成功率。利用本发明的培养方法对采集到的多子小瓜虫进行传代培养，可以稳定的将虫株保存10代以上，最长可以保存98天，随时可为实验提供大量的各生活史阶段的寄生虫活体样本，方便多子小瓜虫研究的开展。

主权项

1.一种多子小瓜虫的传代培养方法，其特征在于包括以下步骤：1)从患病鱼的体表以及鳃中分离出多子小瓜虫的滋养体，用无菌曝气水洗去附着的鱼体黏液后，选取细胞形态好、活力旺盛的滋养体作为原代细胞；2)将选取的滋养体加入到无菌曝气水中，置于培养箱内，在15‑30℃下恒温培养，当培养皿内掠食体全部孵出后，对其进行计数，然后按照掠食体与金鱼的数量比为10000‑50000:1的比例将掠食体与健康金鱼在装有曝气水的养殖缸中进行同居感染，感染周期为0.5‑3小时；3)当养殖缸内的金鱼开始分泌大量粘液后，向养殖缸内加水，并充氧，然后将养殖缸置于培养箱内，在15‑30℃下恒温培养，每天用重新平衡温度后的无菌曝气水对缸内的养殖水进行更换，及时清理死亡的金鱼，4‑5天后，金鱼体表出现大量白点，将感染的金鱼按照步骤一所述方法分离出滋养体，即为第一代传代细胞。4)将第一代传代细胞按照步骤2)到步骤3)的顺序操作，得到第二代传代细胞，依次类推，得到多代传代细胞。