[发明专利]一种百合珠芽脱毒快繁的方法

摘要

本发明提供了一种百合珠芽脱毒快繁的方法，以百合珠芽为材料，采用低温‑高温的交替温度处理结合2次茎尖脱毒培养的方法，能有效去除百合斑驳病毒、百合无症病毒等百合病毒病，脱毒率达到85%以上，剥取的茎尖长度为1.0~1.5 mm左右，对仪器要求不高、容易操作，且茎尖更容易存活，存活率高达90%以上，能短时间内获得长成强壮的种苗，效率更高。进一步利用无毒幼苗的外层下部分鳞片进行组培快繁，提高了不定芽诱导系数和增殖率，芽诱导系数为6.35，不定芽增殖率为3.37，可以有效获得大量优质脱毒幼苗，成本低、效率高，为工厂化育苗奠定了基础。

主权项

1.一种百合珠芽脱毒快繁的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：1）取百合珠芽清洗干净后，将其浸泡在洗衣粉溶液中5~20 min，并在流水下冲洗1~2 h，晾干后备用；2）将预处理后的百合珠芽置于4 ℃的低温处理3~4 d，之后再置于38 ℃高温下处理3~4 d，这样温度交替处理，连续处理24~32d，然后剥去所述珠芽最外层鳞片后进行消毒；所述高温处理期间光照强度为1500lx‑2000lx，光照时间为12h/d，并且喷洒38 ℃无菌水保持其湿度；3）取步骤2）消毒后的珠芽，剥取肉眼可见的茎尖，然后将其接种到MS+1.5 g/L 6‑BA+0.2g/L NAA+10 mg/L病毒唑培养基上，暗培养7 d后，转入培养温度为25±2℃，光照强度为1500lx‑2000lx，日照时间为12 h/d的光照环境下，培养20~30d，诱导不定芽；再从所述不定芽中继续剥取肉眼可见的茎尖，接种到MS+1.5 g/L 6‑BA+0.2g/L NAA+10 mg/L病毒唑培养基上，暗培养7 d后，转入培养温度为25±2℃，光照强度为1500lx‑2000lx，日照时间为12 h/d的光照环境下，培养20~30d，即得到脱毒苗；4）取步骤3）脱毒苗继续培养15~30d，取其外层鳞片，接种到不定芽诱导培养基上进行初代培养诱导产生不定芽，再将不定芽接种于继代增殖培养基上进行继代培养获得增殖苗，然后将增殖苗转移到生根培养基上培养获得生根幼苗，即得到脱毒组培苗。