[发明专利]一种多硫酸化硫酸软骨素的制备方法

摘要

本发明公开了一种多硫酸化硫酸软骨素的制备方法，它包括多硫酸化硫酸软骨素制备、分离纯化、去甲酰胺、脱色、沉淀、冻干等步骤，本发明采用氯磺酸‑甲酰胺混合液对硫酸软骨素进行磺化、加热降解，之后醇沉、过滤、脱色等操作，进一步纯化得到可改善骨关节功能的多硫酸化硫酸软骨素。本发明将磺化和降解反应分开，先加入氯磺酸和甲酰胺进行磺化，后加热进行降解，且经过多步的醇沉和过滤，得到符合分子量、硫羧比、葡萄糖醛酸、游离硫酸盐含量等关键质量指标的多硫酸化硫酸软骨素，高度磺化的多硫酸软骨素含量高于70%，硫酸软骨素硫酸化程度高，性质稳定，不易被天然的硫酸软骨素酶降解，重均分子量Mw为7300～9300Da，具有良好的关节功能改善作用，可用于维持人和动物关节软骨完整性。

主权项

1.一种多硫酸化硫酸软骨素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：a. 制备多硫酸化硫酸软骨素在搅拌状态下，将15%～30%质量百分比浓度的硫酸软骨素甲酰胺溶液与氯磺酸和甲酰胺混合液混合后，在20～30℃下搅拌5小时，再升温至60～70℃降解后搅拌3～5小时，然后加入反应液4体积倍量的95%乙醇搅拌后静置，经固液分离后得到多硫酸化硫酸软骨素沉淀，所述氯磺酸和甲酰胺混合液中氯磺酸与硫酸软骨素的质量比为1.5～1.7:1，甲酰胺与硫酸软骨素的质量比为3～4:1；b. 分离纯化多硫酸化软骨素1、去甲酰胺和沉淀将多硫酸化硫酸软骨素沉淀加入10倍硫酸软骨素投料质量倍量的纯化水溶解后，用氢氧化钠溶液调节pH至7.5～9.0，再加入上述反应液4体积倍量的95%乙醇，静置12小时后沉淀，再将固液分离后的沉淀加10倍硫酸软骨素投料质量倍量的纯化水溶解后，用氢氧化钠溶液调节pH至7.5～9.0后加热至60～65℃，保温3小时后经0.45μm滤膜过滤，再将滤液加入上述反应液4体积倍量的95%乙醇，再静置12小时后固液分离得到去甲酰胺的多硫酸化硫酸软骨素沉淀；2、脱色将去甲酰胺的多硫酸化硫酸软骨素沉淀溶于10倍硫酸软骨素投料质量倍量的纯化水中后加入1%溶液量NaCl搅拌溶解，再持续加入30%过氧化氢溶液，当溶液中过氧化氢浓度为0.5%时，用20%氢氧化钠溶液调整溶液pH值为10，然后在30℃、持续搅拌下将溶液在0.05～0.10MPa的真空度下抽真空脱色12小时，过程中保持pH值10，然后再将溶液恢复常压后在20～30℃下继续静置氧化脱色12小时，得到脱色的多硫酸化硫酸软骨素溶液；3、沉淀将上述脱色的多硫酸化硫酸软骨素溶液经0.45µm的膜过滤后，用3M盐酸调pH值至8.0，再加入步骤a中所述反应液4体积倍量的95%乙醇，静置沉淀12小时后固液分离，再将得到的多硫酸化硫酸软骨素沉淀加入10倍硫酸软骨素投料质量倍量的纯化水溶解，然后加入溶液量的1%NaCl搅拌溶解后，调节溶液pH值为6.0～7.0，经0.45µm或0.22µm的膜过滤得到过滤后的多硫酸化硫酸软骨素沉淀；4、冻干将上述过滤后的多硫酸化硫酸软骨素沉淀加入10倍硫酸软骨素投料质量的纯化水溶解，调节pH值6.0～7.0后经0.45µm的膜过滤后冻干，得到多硫酸化硫酸软骨素冻干品。