[发明专利]一种用于烟草中游离、结合态甾醇同时测定的前处理方法

摘要

本发明涉及用于烟草中游离态和结合态甾醇同时测定的高效前处理方法，利用2.0 mol/L的盐酸‑乙醇溶液在60℃恒温超声水浴中1h完成水解；4 moL/L氢氧化钾‑乙醇溶液在60℃恒温水浴中超声40 min完成皂化；异辛烷、饱和的氯化钾溶液振荡5 min，静置10 min完成总甾醇的萃取；筛板间的无水硫酸钠完成干燥，筛板完成样品的过滤，之后总甾醇在异辛烷中从样品导出管导出，可直接采用液相色谱串联质谱上机检测，完成烟草中甾醇的测定。将烟草中甾前处理的水解、皂化、萃取、干燥、过滤操作在一个前处理装置中完成，在整个样品前处理过程中不需要样品转移就能得到待分析的样品，大大简化了实验操作，提高了前处理效率。

主权项

1.一种用于烟草中游离态和结合态甾醇同时测定的高效前处理方法，其特征在于：按以下步骤进行： 步骤一：将待检测烟草样品粉碎，过40目筛，称取样品0.25 g于外管样品瓶中，加入5.0 mL 2.0 mol/L的盐酸‑乙醇溶液和200 μL浓度为0.5 mg/mL的6‑酮胆甾烷醇内标液； 步骤二：60 ℃恒温超声水浴中超声水解1 h；步骤三：水解完后冷却5min，打开外管密封盖，往酸水解后的萃取液中再加入10 mL4 moL/L的氢氧化钾‑乙醇溶液，再次旋紧密封盖，于60 ℃恒温超声水浴中超声皂化 40 min；步骤四：冷却5min后在皂化液中加入10 mL异辛烷、10 mL饱和的氯化钾溶液；步骤五：把内管柱置入样品瓶，室温下充分振荡5 min后静置10 min，让有机相分离；步骤六：将内管柱向下压，萃取溶液异辛烷相就通过过滤筛板进入两层筛板之间装填的无水硫酸钠，经干燥，从内管柱的样品导出管流出，完成样品过滤和干燥；步骤七：在样品导出管口收集萃取液，弃去最初的2‑3 mL，然后用色谱瓶直接收集1 ‑ 1.5 mL的样品萃取液，供液相色谱串联质谱分析。