[发明专利]一种适于红螯螯虾性腺组织mRNA石蜡切片原位杂交的方法有效
| 申请号： | 201910178865.X | 申请日： | 2019-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN109988846B | 公开（公告）日： | 2023-05-26 |
| 发明（设计）人： | 郑建波;贾永义;顾志敏;程顺;李飞;迟美丽;刘士力;蒋文枰 | 申请（专利权）人： | 浙江省淡水水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6811;C12Q1/6841;C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京国翰知识产权代理事务所(普通合伙) 11696 | 代理人： | 卫翠婷 |
| 地址： | 313001 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供一种适于红螯螯虾性腺组织mRNA石蜡切片原位杂交的方法，属于原位杂交技术领域，包括性腺组织包埋、石蜡切片、原位杂交和拍照记录，其中原位杂交采用探针序列为如SEQ ID NO.3所示。本发明探针对dsx基因的组织定位有明确的特异性，实现了对dsx基因mRNA水平的显示作用；本发明在红螯螯虾中建立了石蜡切片mRNA原位杂交的方法来研究相关基因在性腺中的表达模式，能够清晰地描述红螯螯虾性别相关基因在性腺中的表达定位；本发明方法在石蜡切片脱蜡效果佳的同时避免组织收缩和细胞变形，使得组织仍保持在原位，组织形态保持完整，还能提高酶解效果，使得细胞着色好，核质分明，最终提高原位杂交的准确性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 适于 红螯螯虾 性腺 组织 mrna 石蜡 切片 原位杂交 方法 | ||
【主权项】：
1.一种适于红螯螯虾性腺组织mRNA石蜡切片原位杂交用探针的方法，其特征在于，按照如下步骤：S1步骤：以逆转录得到的红螯螯虾性腺组织cDNA为模板，利用引物通过PCR反应扩增得到dsx基因的部分ORF序列，该序列作为dsx基因mRNA特异的探针序列；S2步骤：构建dsx基因mRNA原位杂交的探针质粒，将探针质粒转化细菌后，细菌培养后进行测序；S3步骤：制备dsx基因mRNA原位杂交探针。
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