[发明专利]一种用于植物基因组编辑载体、及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 201910178891.2 | 申请日： | 2019-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN109880846B | 公开（公告）日： | 2020-08-11 |
| 发明（设计）人： | 陈克贵;彭梅芳;甘凤;宋健兰;舒佳;吴治学 | 申请（专利权）人： | 四川省农业科学院生物技术核技术研究所;成都亿农农业科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/66 |
| 代理公司： | 成都行之专利代理事务所(普通合伙) 51220 | 代理人： | 胡晓丽 |
| 地址： | 610000*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于对植物基因组进行精准编辑的载体，包括依次连接的两个双生病毒大间区LIR、sgRNA表达盒和Cas9D10A基因片段；在两个大间区LIR之间连接有复制相关蛋白Rep/RepA片段、双生病毒小间区SIR和用于DNA重组编辑的HR片段；sgRNA表达盒是依据基因组目标位点DNA序列设计构建。基因编辑载体的构建方法包括以下步骤：第一步，构建质粒PMF115；第二步，构建质粒PMF125；第三步，依据基因组目标位点DNA序列，设计sgRNA表达盒，将sgRNA表达盒克隆到质粒PMF125；第四步，将用于重组的DNA片段HR克隆到质粒PMF115；第五步，将第四步构建质粒中两个LIR之间的DNA片段克隆到第三步构建的质粒中，从而获得最终基因编辑载体。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 植物 基因组 编辑 载体 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种用于植物基因组编辑载体构建的质粒PMF115，其特征在于，所述质粒包含有双生病毒复制相关的小间区SIR、大间区LIR和复制相关蛋白Rep/RepA三个DNA片段，所述双生病毒小间区SIR为Seq No.1，双生病毒大间区LIR为Seq No.2，复制相关蛋白Rep/RepA片段为Seq No.3。
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