[发明专利]一种介导双链RNA进入中华紫胶虫体内的方法

摘要

本发明涉及一种介导双链RNA进入中华紫胶虫体内的方法，属于基因工程技术领域。该方法首先提取中华紫胶虫总RNA并反转录为cDNA后进行PCR扩增，扩增产物和L4440载体经SacI和SalI双酶切，酶切产物利用T4连接酶连接过夜，得到的FAD‑L4440重组质粒转入到HT115感受态细胞中，扩大培养至菌液OD600为0.1~0.7，加入IPTG诱导2~5h，得到FAD‑L4440‑HT115菌体，将菌体稀释后直接涂抹在中华紫胶虫幼虫期虫体上。本发明方法能将dsRNA转染到紫胶虫体内，有效干扰FAD基因表达量，从而引起个体泌胶量降低，为RNAi转染过程中不适用注射法、喂食等转染方法的昆虫提供参考。

主权项

1.一种介导双链RNA进入中华紫胶虫体内的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），提取中华紫胶虫总RNA并反转录为cDNA后进行PCR扩增，扩增产物和L4440载体经SacI和SalI双酶切，酶切产物利用T4连接酶连接过夜，得到FAD‑L4440重组质粒；步骤（2），将步骤（1）得到的FAD‑L4440重组质粒转入到HT115感受态细胞中，扩大培养至菌液OD₆₀₀为0.1~0.7，加入IPTG诱导2~5h，得到FAD‑L4440‑HT115菌体；步骤（3），将步骤（2）得到的FAD‑L4440‑HT115菌体稀释至浓度为6.2ng•mL^‑1~620ng•mL^‑1，然将采用稀释后的菌液直接涂抹在中华紫胶虫幼虫期虫体上。