[发明专利]一种高活性生物农药微囊缓释剂的制备方法及应用

摘要

本发明提供了一种高活性生物农药微囊缓释剂的制备方法及应用，属于农作物病害防治领域。本发明通过低频电磁场辐射处理种子液、分段补料发酵的方法实现了芽孢杆菌的高密度培养，显著提高了芽孢杆菌的活菌数及芽孢率，并以此为有效成分通过新型微囊技术制备成微囊缓释剂。与传统生物农药剂型相比，该剂型可以在较长时间内保持有效成分的活性，增加菌体的储存稳定性，延长产品的货架期，显著提高对病害防治的稳定性，并且解决了粉尘污染问题，对环境友好。将本发明的生物农药用于防治大豆菌核病等病害，其防治效果与常规化学药剂无显著差异，而且对环境无污染，适合产业化生产推广。

主权项

1.一种高活性生物农药微囊缓释剂的制备方法及应用，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：1）菌种活化：无菌条件下分别将环蜡状芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌的保藏菌种转接至LB斜面培养基，置于30℃恒温培养12h，如此转接3次使菌种恢复活性；2）种子液的制备：取活化后的蜡状芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌，分别以2%的接种量接入种子培养基中进行摇瓶培养24h，在培养过程中对种子液间歇性施加低频电磁场辐射；摇瓶培养的条件为：装液量100mL/500mL，培养温度30℃，摇床转速180rpm；3）分段补料发酵培养：以5%的总接种量将蜡状芽孢杆菌种子液和解淀粉芽孢杆菌种子液接入发酵培养基中，培养基pH调节为7.0‑7.4，装液量为发酵罐体积的40‑50%，发酵温度为34‑36℃，通气量为1.1‑1.3VVM，转速为220‑260rpm，在芽孢杆菌生长进入对数期时，每隔8h补加1次补料培养基1，一共补加3次，在芽孢杆菌生长进入稳定期时，补加1次补料培养基2，总发酵时间为38‑40h；4）微囊芯的制备：发酵结束后，取发酵液在4℃和4000r/min的条件下离心15min，除去上清液后将菌体沉淀用无菌生理盐水洗涤2‑3次，然后重悬于1.5%海藻糖溶液中，制成微囊芯；5）微囊缓释剂的制备：称取β‑环糊精溶于适量蒸馏水中，在50℃下水浴加热，磁力搅拌一段时间，直至完全溶解形成饱和水溶液作为微囊壁材料，将制备好的微囊芯以1:8（V/V）的比例加入上述微囊壁材料中，再置于超声波振荡器中进行辅助包覆处理，处理结束后待混合溶液冷却至室温再进行减压抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤后置于40℃下真空干燥24h，即得生物农药微囊缓释剂。