[发明专利]CRISPR/Cas9介导的羊FGF5基因敲除和定点整合MTNR1A基因的方法在审
| 申请号： | 201910183972.1 | 申请日： | 2019-03-12 |
| 公开（公告）号： | CN109868275A | 公开（公告）日： | 2019-06-11 |
| 发明（设计）人： | 刘国世;李广栋;张鲁;连正兴;吕东颖;姚昱君;吴昊;朱天奇;姬鹏云 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/85;C12N15/90;C12N15/12;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;黄爽 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供一种CRISPR/Cas9介导的羊FGF5基因敲除和定点整合MTNR1A基因的方法。将特异靶向羊FGF5基因第三外显子的CRISPR/Cas9打靶载体和基因同源重组载体共同转入羊胎儿成纤维细胞中，获得羊FGF5基因敲除且定点整合MTNR1A基因的细胞。本发明通过核转的方式将供体载体和打靶载体共转染羊胎儿成纤维细胞，通过Gibson Assembly方法构建的无标记供体载体中CYP17启动子可以使MTNR1A实现在羊卵巢组织中特异性表达。分离鉴定出的阳性单克隆细胞株可作为体细胞核移植的核供体获得克隆胚胎，进而为培育生殖系统局部强化褪黑素信号且多产毛的转基因克隆羊打下坚实基础。 | ||
| 搜索关键词： | 定点整合 基因敲除 基因 成纤维细胞 打靶载体 供体载体 羊胎儿 介导 基因同源重组 体细胞核移植 转基因克隆羊 第三外显子 特异性表达 阳性单克隆 坚实基础 局部强化 克隆胚胎 卵巢组织 生殖系统 特异靶向 共转染 核供体 启动子 无标记 细胞株 构建 黑素 转入 细胞 培育 | ||
【主权项】：
1.基于CRISPR/Cas9技术特异靶向羊FGF5基因的sgRNA，其RNA序列如SEQ ID NO:1所示。
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