[发明专利]一种高产泛酸的基因工程菌、构建方法及应用有效
| 申请号： | 201910194215.4 | 申请日： | 2019-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN109868254B | 公开（公告）日： | 2021-02-19 |
| 发明（设计）人： | 柳志强;张博;郑裕国;张小明 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/90;C12N15/70;C12N15/54;C12N15/53;C12N15/52;C12P13/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 浙江千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 冷红梅 |
| 地址： | 310000 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种高产泛酸的基因工程菌及其构建方法，以及该基因工程菌在微生物发酵制备D‑泛酸中的应用。本发明通过(1)强化大肠杆菌D‑泛酸合成途径的最后一步，增强大肠杆菌对胞外β‑丙氨酸的利用能力，(2)强化泛解酸合成途径，(3)修复ilvG基因，减弱副产物对泛解酸合成途径的反馈抑制作用，(4)根据细胞表型变化，削弱缬氨酸合成途径的通量，得到D‑泛酸高产的大肠杆菌基因工程菌株。本发明强化D‑泛酸生物生成途径中关键酶PanB、PanC、PanE和IlvC的表达，通过修复ilvG基因削弱反馈调控和强化泛解酸合成途径，使D‑泛酸和缬氨酸在胞外积累分别达到0.48g/L和0.51g/L，通过敲除avtA和敲降ilvE对竞争支路进行削弱得到一株无质粒高产菌，D‑泛酸效价从0.48g/L提高到1.54g/L。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高产 泛酸 基因工程 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种高产泛酸的基因工程菌，由如下方法构建而成：(1)将底盘菌E.coli W3110基因组中的panC、panB、panE和ilvC基因的启动子替换为trc启动子，得到E.coli W3110(Trc‑panCpanEpanBilvC)；(2)在E.coli W3110(Trc‑panCpanEpanBilvC)基因组中修复ilvG基因，得到E.coliW3110(Trc‑panCpanEpanBilvC ilvG*)；(3)将E.coli W3110(Trc‑panCpanEpanBilvC ilvG*)中avtA基因敲除，得到E.coliW3110(△avtA Trc‑panCpanEpanBilvC ilvG*)；(4)将E.coli W3110(△avtA Trc‑panCpanEpanBilvC ilvG*)中上ilvE基因的起始密码子ATG替换为GTG，得到E.coli W3110(△avtA Trc‑panCpanEpanBilvC ilvG*ilvE*)，即所述高产泛酸的基因工程菌。
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