[发明专利]利用磁小体编码基因对外源细胞进行活体示踪的方法在审
| 申请号： | 201910196842.1 | 申请日： | 2019-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN110055279A | 公开（公告）日： | 2019-07-26 |
| 发明（设计）人： | 朱剑虹;魏乃礼;王帆;朱侗明 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属华山医院;朱剑虹 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;A61K49/18 |
| 代理公司： | 上海开祺知识产权代理有限公司 31114 | 代理人： | 张晓敏;费开逵 |
| 地址： | 200040 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 利用磁小体编码基因对外源细胞进行活体示踪的方法，将编码磁小体的关键基因mms6导入至外源细胞基因组内，诱导外源细胞表达mms6蛋白，此蛋白可以结合内源性铁离子，在体内合成内源性铁磁性纳米颗粒；将外源细胞移植入体内后，定期进行核磁共振扫描，通过核磁共振T2豫驰像检测出内源性的铁磁性纳米颗粒信号，可即时定位移植的外源细胞的位置。本发明中磁小体编码基因mms6所产生的示踪信号可传代给子代细胞，让外源细胞示踪信号持续存在，实现外源细胞的长期活体示踪。 | ||
| 搜索关键词： | 外源细胞 磁小体 编码基因 内源性 活体 示踪 铁磁性纳米颗粒 示踪信号 源细胞 蛋白 传代 核磁共振扫描 移植 关键基因 体内合成 子代细胞 核磁共振 基因组 铁离子 像检测 诱导 体内 | ||
【主权项】：
1.利用磁小体编码基因对外源细胞进行活体示踪的方法，包括以下步骤：1)基因修饰使用mms6慢病毒质粒转染外源细胞；其中，所述外源细胞的汇集度在50‑60％，mms6慢病毒质粒数目：外源细胞数目＝5‑10：1，转染后使用嘌呤霉素筛选稳定表达mms6蛋白的外源细胞，嘌呤霉素浓度为2‑5μg/ml；2)诱导磁小体基因的表达将筛选出的外源细胞转入铁离子培养基中培养5‑12天，外源细胞内生成内源性铁磁性纳米颗粒；其中，所述的铁离子培养基以DMEM/F12为基本培养基，含有柠檬酸铁40‑160μM、胎牛血清0.1‑1.0vol％和维生素C 100‑400μM；3)示踪定位将外源细胞移植入体内，移植后定期进行核磁共振扫描，使用T2序列，或SWI序列，或QSM序列扫描，可即时定位移植的外源细胞的位置，进行外源细胞的长期活体示踪。
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