[发明专利]一种基于适配体固有构象诱导的检测黄曲霉毒素B1的方法

摘要

本发明公开了一种基于适配体固有构象诱导的检测黄曲霉毒素B1的方法，利用TAMRA荧光分子标记黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）的核酸适配体，并加入能特异性识别并嵌入DNA双链结构而发强光的EvaGreen分子，基于荧光共振能量转移（FRET）机制，通过核酸适配体分子对目标分子固有构象响应的变化，结合双链染料EvaGreen的荧光显色，对AFB1进行快速均相定量。本发明公开的方法只利用了核酸适配体的自身结构，避免了核酸探针的复杂设计，另一方面，所有反应在室温下的一个管内进行一次混合步骤即可，消除了分离和温度控制的步骤。该方法具有原理简单、成本低廉、灵敏度高以及选择性好等优点，对AFB1的检测限为0.32 ng/ml，并能对不同食品基质的样品进行检测，是具有竞争力的AFB1快速检测方法。

主权项

1.一种基于适配体固有构象诱导的检测黄曲霉毒素B₁的方法，其特征在于，包括如下步骤：（a）制备黄曲霉毒素B₁浓度与荧光强度的标准曲线；（b）按上述制备标准曲线的过程进行待测样品的检测，得到待测样品的荧光强度，通过上述标准曲线计算待测样品中黄曲霉毒素B₁的浓度；其中，制备标准曲线的步骤包括：（1）在缓冲液体系中加入特异性识别双链DNA的荧光染料与AFB₁核酸适配体，制备得到AFB₁检测液；所述缓冲液体系包括：超纯水，33 mM Tris‑HCl (pH 7.9 at 25 ℃), 10 mM MgCl₂, 66 mM KCl；所述荧光染料为具有嵌入DNA双链结构而发强光性质的EvaGreen分子；所述核酸适配体在其5’端标记有TAMRA荧光分子，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示；（2）在AFB₁检测液中加入不同浓度的AFB₁标准溶液，混匀并反应；（3）测定步骤（2）得到的反应混合溶液的荧光强度，得到荧光强度随AFB₁浓度变化的标准曲线。