[发明专利]ATP生物荧光lgCA-lgIA标准曲线法检测抗菌陶瓷抗真菌性能的方法

摘要

本发明涉及一种抗菌陶瓷抗真菌性能检测方法，检测步骤包括：样品制备及前处理；设备选型及试剂、培养基配制；菌种保藏、活化及菌悬液制备；美蓝染色后菌悬液活菌含量C_B血球板计数；ATP浓度对数值lgC_A‑相对荧光强度对数值lgI_A标曲建立及接种菌液活菌C_A标定；样品接种、培养及洗脱回收；回收液I_A测定及活菌ATP浓度C_A和T_A推算；抗菌率R或抗菌活性值A计算；结果评价；其特别之处在于：应用ATP荧光光度计对以R或A表征的陶瓷抗真菌性能进行精准定量测试。本发明规定洗脱回收接触0h及培养24h/48h后对照样品和抗菌样品，测定其I_A并以lgI_A表征和计算R或A；提供结果评价依据。本发明研发的陶瓷抗真菌性检测的ATP生物荧光lgC_A‑lgI_A标曲法，将以先进检测技术支撑产品质量提升。

主权项

1.一种抗菌陶瓷抗真菌性能的检测方法，包括：(1)样品制备及前处理；(2)设备选型及试剂、培养基配制；(3)菌种保藏、活化及菌悬液制备；(4)美蓝染色后菌悬液活菌含量C_B的血球板计数；(5)ATP浓度对数值lgC_A‑相对荧光强度对数值lgI_A标准曲线建立及接种菌液的活菌ATP浓度C_A标定；(6)样品接种、培养及洗脱回收；(7)回收液相对荧光强度值I_A测定；(8)回收液活菌ATP浓度C_A和T_A推算及抗菌率R和抗菌活性值A计算；(9)结果评价；其特征在于，应用ATP荧光光度计对以抗菌率R或抗菌活性值A表征的抗菌陶瓷抗真菌性能进行精准定量测试的ATP生物荧光lgC_A‑lgI_A标准曲线法，具体的：在回收液相对荧光强度值I_A测定中：明确对照样品和抗菌样品的数量、尺寸及吸水率要求，对样品进行灭菌和吸水处理；将真菌试验菌种的标准菌株进行传代、活化后，取新鲜白色念珠菌或霉菌孢子培养物制备菌悬液；经美蓝染色后用血球计数板测定菌液中活菌含量C_B，并对不同稀释度的菌悬液进行C_B标定，然后，用ATP荧光试剂缓冲溶液将1.0×10^‑3mol/L的ATP标准原液稀释为高、低浓度标准系列溶液：7.0×10^‑8mol/L、7.0×10^‑7mol/L、7.0×10^‑6mol/L和2.1×10^‑9mol/L、2.1×10^‑8mol/L、2.1×10^‑7mol/L，测定其相对荧光强度值I_A；绘制两条相应浓度的lgC_A‑lgI_A标准曲线，推导得出曲线方程式Y＝a_A0X+b_A0(高浓度)、Y＝a_AX+b_A(低浓度)和线性相关系数R_A0²(高浓度)、R_A²(低浓度)，同时，用察氏培养液对活菌含量C_B为1.0×10⁸CFU/mL～5.0×10⁸CFU/mL的试验菌种悬浮液进行连续10倍梯度稀释，测定稀释菌液的相对荧光强度值I_A，根据高浓度标准曲线方程式Y＝a_A0X+b_A0推算相应的活菌ATP浓度C_A；经调整得到C_A范围为5.0×10^‑7mol/L～9.0×10^‑7mol/L的接种菌液，然后，向各组样品待测表面分别滴加0.3mL接种菌液，采用4.6mL洗脱液立即对6组0h接触样品进行洗脱回收，测定回收液的相对荧光强度值I_AC0ij、I_AT0ij，并根据低浓度标准曲线方程式Y＝a_AX+b_A推算其活菌ATP浓度C_AOij和T_AOij，同时，在95％RH±2％RH的湿度条件下，将6组密封于无菌平皿内的对照样品及抗菌样品在(30±2)℃(白色念珠菌)培养24h±2h或(28±2)℃(霉菌)培养48h±2h后；采用与0h接触样品相同的方式洗脱回收表面残留菌并测定其回收液的相对荧光强度值I_ACtij、I_ATtij，推算相应的活菌ATP浓度C_Atij和T_Atij；在抗菌率R及抗菌活性值A计算中：根据ATP低浓度标准曲线lgC_A‑lgI_A的线性方程式Y＝a_AX+b_A，以0h接触及24h或48h培养条件下每件对照样品和抗菌样品回收液的相对荧光强度测定值和作为基础数据；在试验有效条件下，计算其经24h或48h培养后的真菌增长值F_ij、G_ij以及抗菌率R_ij和抗菌活性值A_ij；对每组样品的R_ij和A_ij取算术平均值得到相应的R_i和A_i；每批抗菌陶瓷样品的抗菌率R和抗菌活性值A为三组样品R_i和A_i的算术平均值；同时明确相关数据修约和测量不确定度要求；在结果评价中：参考卫生行业通用做法和相关抗菌产品标准要求，确定抗真菌性能分级判定标准；当某组(件)抗菌陶瓷样品的抗菌率R_i(R_ij)或抗菌活性值A_i(A_ij)与其他两组(四件)样品的抗真菌性能相比至少相差一个水平级时，重新提取一组(件)样品重复实验；计算其经ATP生物荧光lgC_A─lgI_A标准曲线法测得的抗菌率或抗菌活性值，如果前后两组(件)抗菌陶瓷样品抗真菌性能水平相同，则弃之；取另外两组(四件)剩余样品抗菌率R_i(R_ij)或抗菌活性值A_i(A_ij)的算术平均值作为该批次(组)抗菌陶瓷样品抗真菌性能的评价结果。