[发明专利]ATP生物荧光lgCA-lgIA标准曲线法检测抗菌塑料抗细菌性能的方法

摘要

本发明涉及一种抗菌塑料抗细菌性能检测方法，检测步骤包括：样品制备及前处理；设备选型及试剂、培养基配制；菌种保藏、活化及菌悬液制备；ATP浓度对数值lgC_A‑相对荧光强度对数值lgI_A标曲建立及接种菌液的活菌ATP浓度C_A标定；样品接种、培养及洗脱回收；回收液I_A测定及其活菌ATP浓度C_A和T_A推算；抗菌率R或抗菌活性值A计算；结果评价；其特别之处在于：应用ATP荧光光度计对以R或A表征的塑料抗细菌性能进行精准定量测试。本发明规定洗脱回收接触0h及培养24h后的对照样品和抗菌样品，测定回收液I_A并以lgI_A表征和计算R或A；提供结果评价依据。本发明研发的抗菌塑料抗细菌性能检测的ATP生物荧光lgC_A‑lgI_A标曲法，将以先进的检测技术支撑产品质量提升和市场秩序规范。

主权项

1.一种抗菌塑料抗细菌性能的检测方法，包括：(1)样品制备及前处理；(2)设备选型及试剂、培养基配制；(3)菌种保藏、活化及菌悬液制备；(4)ATP浓度对数值lgC_A‑相对荧光强度对数值lgI_A标准曲线建立及接种菌液活菌ATP浓度C_A标定；(5)样品接种、培养及洗脱回收；(6)回收液相对荧光强度值I_A测定；(7)回收液活菌ATP浓度C_A和T_A推算以及抗菌率R和抗菌活性值A计算；(8)结果评价；其特征在于，应用ATP荧光光度计对以抗菌率R或抗菌活性值A表征的抗菌塑料抗细菌性能进行精准定量测试的ATP生物荧光lgC_A‑lgI_A标准曲线法，具体的：在回收液相对荧光强度值I_A测定中：明确对照样品和抗菌样品的数量、尺寸及前处理要求，将试验标准菌株进行传代、活化后，取连续转接2次的新鲜细菌培养物制备菌悬液并对其菌数进行初筛，用试验菌种培养液将1.0×10^‑3mol/L的ATP标准原液稀释为高、低浓度标准系列溶液：7.0×10^‑9mol/L、7.0×10^‑8mol/L、7.0×10^‑7mol/L(如果仪器检测上限无法达到10^‑7mol/L量级或高浓度标准曲线的线性较差，可将其ATP浓度系列改为7.0×10^‑10mol/L、7.0×10^‑9mol/L、7.0×10^‑8mol/L)和4.2×10^‑11mol/L、4.2×10^‑10mol/L、4.2×10^‑9mol/L，并测定其相对荧光强度值I_A；绘制两条相应浓度的lgC_A‑lgI_A标准曲线，推导得出曲线方程式Y＝a_A0X+b_A0(高浓度)、Y＝a_AX+b_A(低浓度)和线性相关系数R_A0²(高浓度)、R_A²(低浓度)，对细菌总量为6.0×10⁸CFU/mL的菌悬液进行10倍梯度稀释后，测定其相对荧光强度值I_A，根据高浓度标准曲线方程式Y＝a_A0X+b_A0推算相应的活菌ATP浓度C_A；经调整得到C_A范围为5.0×10^‑8mol/L～9.0×10^‑8mol/L的接种菌液，然后，向各组对照样品和抗菌样品待测表面分别滴加0.3mL菌液，立即用4.7mL洗脱液对6组0h接触样品进行洗脱回收；应用ATP荧光光度计测定回收液的相对荧光强度值I_AC0ij、I_AT0ij，根据低浓度标准曲线方程式Y＝a_AX+b_A推算其活菌ATP浓度C_AOij和T_AOij，同时，将6组24h接触样品密封于无菌平皿内，(37±1)℃、(90±2)％RH培养24h±2h后；采用与0h接触样品相同的方式回收表面残留菌并测定其回收液的相对荧光强度值I_ACtij、I_ATtij，推算相应活菌ATP浓度C_Atij和T_Atij；在抗菌率R及抗菌活性值A计算中：根据ATP低浓度标准曲线lgC_A‑lgI_A线性方程式Y＝a_AX+b_A，以0h接触及24h培养后每件对照样品和抗菌样品回收液的相对荧光强度测定值和作为基础数据；在试验有效条件下，计算其经24h培养后的细菌增长值F_ij、G_ij以及抗菌率R_ij和抗菌活性值A_ij；对每组样品的R_ij和A_ij取算术平均值得到相应的R_i和A_i；每批抗菌塑料样品的抗菌率R和抗菌活性值A为其3组样品R_i和A_i的算术平均值；并明确相关数据修约和测量不确定度要求；在结果评价中：参考卫生行业通用做法和相关抗菌产品标准要求，确定抗细菌性能分级判定标准；当某组(件)抗菌塑料样品的抗菌率R_i(R_ij)或抗菌活性值A_i(A_ij)与其他两组(四件)样品的抗细菌性能相比至少相差一个水平级时，重新提取一组(件)样品重复实验；计算其经ATP生物荧光lgC_A─lgI_A标准曲线法测得的抗菌率或抗菌活性值，如果前后两组(件)抗菌塑料样品抗细菌性能水平相同，则弃之；取另外两组(四件)剩余样品抗菌率R_i(R_ij)或抗菌活性值A_i(A_ij)的算术平均值作为该批次(组)抗菌塑料样品抗细菌性能的评价结果。