[发明专利]ATP荧光lgCA-lgIA标曲法评价一次性卫生用品真菌杀灭效果的方法

摘要

本发明涉及一种一次性卫生用品真菌杀灭效果评价方法，检测步骤包括：样品提取等要求；设备选型及试剂、培养基配制；菌种保藏、活化及菌悬液制备；美蓝染色后菌悬液活菌含量C_B血球板计数；ATP浓度对数值lgC_A‑相对荧光强度对数值lgI_A标曲建立及接种菌液活菌C_A标定；中和剂鉴定及杀菌试验；回收液I_A测定及C_A推算；杀菌率R和灭菌指数A计算；结果评价；其特别之处在于：应用ATP荧光光度计对以R或A表征的卫生用品真菌杀灭效果进行精准定量评价。本发明规定洗脱回收染菌不同时间后的对照样品和试验样品，测定回收液I_A并以lgI_A表征和计算R或A；提供结果评价依据。本发明研发的一次性卫生用品真菌杀灭效果评价的ATP生物荧光lgC_A‑lgI_A标曲法，可完善相关评价方法体系。

主权项

1.一种一次性卫生用品真菌杀灭效果的评价方法，包括：(1)样品提取等要求；(2)设备选型及试剂、培养基配制；(3)菌种保藏、活化及菌悬液制备；(4)美蓝染色后菌悬液活菌含量C_B的血球板计数；(5)ATP浓度对数值lgC_A‑相对荧光强度对数值lgI_A标准曲线建立及接种菌液的活菌ATP浓度C_A标定；(6)中和剂鉴定及杀菌试验；(7)回收液相对荧光强度值I_A测定；(8)回收液的活菌ATP浓度C_A和T_A推算以及杀菌率R和灭菌指数A计算；(9)结果评价；其特征在于，应用ATP荧光光度计对以杀菌率R或灭菌指数A表征的一次性卫生用品真菌杀灭效果进行精准定量评价的ATP生物荧光lgC_A‑lgI_A标准曲线法，具体的：在回收液相对荧光强度值I_A测定中：明确对照样品和试验样品的提取、数量、尺寸等要求，将真菌试验菌种的标准菌株进行传代、活化后，取新鲜白色念珠菌或霉菌孢子培养物制备菌悬液；经美蓝染色后用血球计数板测定菌液中活菌含量C_B，并对不同稀释度的菌悬液进行C_B标定，然后，用ATP荧光试剂缓冲溶液将1.0×10^‑3mol/L的ATP标准原液稀释为高、低浓度标准系列溶液：7.0×10^‑8mol/L、7.0×10^‑7mol/L、7.0×10^‑6mol/L和1.4×10^‑9mol/L、1.4×10^‑8mol/L、1.4×10^‑7mol/L，测定其相对荧光强度值I_A；绘制两条相应浓度的lgC_A‑lgI_A标准曲线，推导得出曲线方程式Y＝a_A0X+b_A0(高浓度)、Y＝a_AX+b_A(低浓度)和线性相关系数R_A0²(高浓度)、R_A²(低浓度)，同时，用察氏培养液对活菌含量C_B为5.0×10⁸CFU/mL～9.0×10⁸CFU/mL的试验菌种悬浮液进行连续10倍梯度稀释，测定稀释菌液的相对荧光强度值I_A，根据高浓度标准曲线方程式Y＝a_A0X+b_A0推算其相应的活菌ATP浓度C_A；经调整得到C_A为5.0×10^‑7mol/L～9.0×10^‑7mol/L的接种菌液，在中和剂鉴定结果合格的条件下，向每件对照样品和试验样品的2块样片表面分别滴加0.1mL菌液并涂布均匀；待杀菌作用持续2、5、10、20min后，用4.7mL中和剂溶液对其进行洗脱回收，应用ATP荧光光度计测定回收液的相对荧光强度值和根据低浓度标准曲线方程式Y＝a_AX+b_A推算相应的活菌ATP浓度C_Aij和T_Aij；在杀菌率R或灭菌指数A计算中：根据ATP低浓度标准曲线lgC_A‑lgI_A的线性方程式Y＝a_AX+b_A，以不同染/灭菌时间条件下每件对照样品和试验样品回收液的相对荧光强度测定值和作为基础数据；计算其在一个完整灭菌周期内的杀菌率R_ij和灭菌指数A_ij；对每组样品的R_ij和A_ij取算术平均值得到相应的R_i和A_i；每批一次性卫生样品的杀菌率R和灭菌指数A为其三组样品R_i、A_i的算术平均值；并明确相关数据修约和测量不确定度要求；在结果评价中：参考卫生行业通用做法和相关抗菌产品标准要求，确定真菌杀灭效果分级判定标准；当某组(件)一次性卫生样品的杀菌率R_i(R_ij)或灭菌指数A_i(A_ij)与其他两组(件)样品的真菌杀灭效果相比至少相差一个水平级时，重新提取一组(件)样品重复实验；计算其经ATP生物荧光lgC_A─lgI_A标准曲线法测得的杀菌率或灭菌指数，如果前后两组(件)一次性卫生样品的真菌杀灭效果水平相同，则弃之；取另外两组(件)剩余样品杀菌率R_i(R_ij)或灭菌指数A_i(A_ij)的算术平均值作为试验批次一次性卫生样品真菌杀灭效果的评价结果。