[发明专利]一种以胆酸为原料通过半酶法合成熊去氧胆酸的方法

摘要

本发明公开了一种以胆酸为原料通过半酶法合成熊去氧胆酸的方法，先采用化学法将胆酸的三羟基转化为酮基，再利用特有的3α羟基脱氢酶、7β羟基脱氢酶及一些辅酶因子，定向高效还原转化羟基，最后利用黄鸣龙反应清除12位酮基，得熊去氧胆酸粗品。本发明合成方法环保、安全、高效，且每步工艺的转化率均在95%以上。

主权项

1.一种以胆酸为原料通过半酶法合成熊去氧胆酸的方法，其特征在于，包括将胆酸氧化为去氢胆酸的步骤，酶法转化为3α，7β‑二羟基‑12酮‑5β‑ 胆甾烷‑24‑酸的步骤，以及利用黄鸣龙反应转化为熊去氧胆酸的步骤，具体工艺方法如下：一、将胆酸氧化为去氢胆酸，即3、7、12‑三酮基‑5β‑ 胆甾烷‑24‑酸的制备（1.1）取胆酸及8倍胆酸份量的溶媒A泵入氧化罐中，常温下搅拌溶解后，加入0.2倍胆酸份量的冰乙酸搅拌30分钟，调节PH值为2‑4；取样检查待完全溶解后，加入冷冻液制冷，使溶液温度降至0‑5℃，待用；（1.2）在氧化罐中分三次加入胆酸份量25‑30%的氧化剂，控制温度为5‑10℃，继续保温1小时，HPLC监控反应程度，至胆酸含量小于0.2%；（1.3）在氧化罐中加入20%的氢氧化钠水溶液，调节PH值为9‑10，继续搅拌30分钟，打开氧化罐底阀将溶液泵入浓缩釜；（1.4）对浓缩釜蒸汽加热回收溶媒A，至釜内溶液呈浓稠膏状，加入自来水，继续蒸馏残余溶媒A，气相色谱检查至馏分中溶媒A含量至1%以下，将溶液冷却至35‑40℃，待用；（1.5）将步骤（1.4）中待用的溶液泵入酸化釜，边搅拌边加入10%的盐酸水溶液，调节PH值为2‑3，继续搅拌30分钟；离心，母液进入污水站处理；收集物料，得去氢胆酸湿品（3、7、12‑三酮基‑5β‑ 胆甾烷‑24‑酸），待用；二、3α，7β‑二羟基‑12酮‑5β‑ 胆甾烷‑24‑酸的制备（2.1）在酶解釜中加入纯化水，边搅拌边加入待用的去氢胆酸湿品，水的份量为去氢胆酸湿品的5倍，然后加入胆酸份量3‑3.5%的磷酸二氢钠，采用20%的氢氧化钠水溶液调节PH值为7‑8，温度控制为30‑35℃，搅拌溶解后，待用；（2.2）在酶解釜中加入胆酸份量50‑60%的葡萄糖，搅拌15分钟后，继续加入胆酸份量13‑14%MU的3α脱氢菌体酶、胆酸份量13‑14%MU的7β脱氢菌体酶、胆酸份量50‑60%MU的葡萄糖脱氢菌体酶、胆酸份量万分之1.4‑1.5的辅酶一、胆酸份量万分之2.3‑2.5的辅酶二；滴加5%的氢氧化钠水溶液稳定PH值为7‑7.5，反应3小时，HPLC监控去氢胆酸含量＜0.2%，3、12‑二酮基‑7β羟基胆烷酸含量＜0.2%，7、12‑二酮基‑3α羟基胆烷酸含量＜0.2%，即可；采用蒸汽加热至液温达50℃，保温30分钟，待用；（2.3）将步骤（2.2）中的酶解液通过隔膜压滤机分离酶渣，完成后在釜内加入纯化水清洗酶渣，合并滤液进入酸化罐，酶渣废弃；（2.4）在酸化罐中开启冷却水，使溶液温度降至35‑40℃，搅拌滴加10%的盐酸水溶液调节PH值为2‑3，保温搅拌10分钟，投入压滤机，压滤分离胆汁酸，酸水进入污水站处理，收集得湿品物料（3α，7β‑二羟基‑12酮‑5β‑ 胆甾烷‑24‑酸）；（2.5）将步骤（2.4）中收集的湿品物料投入真空耙式干燥机，控温80℃，真空干燥至水分＜2.0%，收集物料待用；三、黄鸣龙反应制备熊去氧胆酸（3.1）将步骤（2.5）中待用的物料投入高温反应釜中，加入2倍物料份量的水，加入4倍物料份量的溶媒B，加入0.15倍物料份量的氢氧化钠、0.11倍物料份量的水合肼，油浴加热升温至140℃，回收收集废水；控温达到140℃后开启回流，保温2小时反应；（3.2）开启回收，继续升温至200℃，此间回收多余的水合肼，保温200℃回流2‑4小时，抽样检测，HPLC监控3α，7β‑二羟基‑12酮‑5β‑ 胆甾烷‑24‑酸的含量＜0.2%；（3.3）控制真空度‑0.07Mpa，温度控制在120‑140℃，真空回收溶媒B，收集溶媒B套用，至膏状，停止浓缩；（3.4）加入8倍物料份量的水，搅拌使膏状物充分溶解，转移至酸化釜中，加入冷却水降温至40‑50℃，搅拌加入10%的盐酸水溶液调节PH值为2‑3，保温10‑30分钟，析出熊去氧胆酸粗品，压滤分离，废水进入污水站，收集物料进入沸腾床干燥机，控温100℃干燥4小时，得熊去氧胆酸粗品，检测其纯度为95%以上。