[发明专利]基于SPR技术的烟碱类杀虫剂噻虫啉残留检测方法

摘要

本发明公开了一种用于检测新烟碱类杀虫剂噻虫啉残留的SPR免疫传感检测方法。本发明以抗原抗体免疫反应为基本原理，将抗体作为传感器敏感识别元件，利用直接竞争法快速、方便结合SPR技术对杀虫剂噻虫啉进行残留检测，通过化学键将噻虫啉单克隆抗体固定在SPR芯片表面，与待测液中的噻虫啉小分子结合引起信号，提高其检测灵敏度，改善检测方位，建立信号放大的间接竞争抑制法。方法的最低检出限为0.197ng/mL，IC₅₀为2.13ng/mL,检测范围在1.18‑2.81ng/mL之间，使得检测更灵敏。

主权项

1.基于SPR技术的烟碱类杀虫剂噻虫啉残留检测方法，其特征在于包括以下步骤：步骤(1)：将SPR芯片作为传感芯片；步骤(2)：校正流通通道、用缓冲液洗涤SPR芯片；步骤(3)：往SPR芯片表面通入200～400μL的EDC/NHS混合液，流速为10～30μL/min，从而活化SPR芯片表面的羧基基团；所述EDC/NHS混合液中，EDC浓度为(0.4±0.04)M，NHS浓度为(0.1±0.01)M；以水为溶剂；步骤(4)：在步骤(3)所得的活化表面羧基后的SPR芯片上流入0.5～2.0μL/min噻虫啉单克隆抗体稀释液，使其偶联到活化过的羧基上，直至SPR芯片饱和；噻虫啉单克隆抗体稀释液为：用pH4.0～5.5的乙酸钠缓冲溶液稀释噻虫啉单克隆抗体至浓度为20±5μg/ml，得噻虫啉单克隆抗体稀释液；步骤(5)：在步骤(4)所得的噻虫啉抗体偶联后的SPR芯片上以10～30μL/min的流速通入70～100μL乙醇胺盐酸盐溶液，用以封闭未反应的活化过的羧基位点；步骤(6)：用PBS‑P⁺缓冲液将噻虫啉原药稀释成系列浓度的噻虫啉溶液，10～30μL.min^‑1进样(120±20)s，再将(10±2)mM NaOH以10～30μL.min^‑1的流速流过芯片表面，使得再生后的RU值与结合噻虫啉溶液前的RU值相同，然后根据结合反应前后RU变化值与噻虫啉浓度来建立标准曲线；步骤(7)：取30‑50μL待测样品，以10～30μL.min^‑1的流速通入SPR芯片，再将(10±2)mM NaOH以10～30μL.min^‑1的流速流过芯片表面，使得再生后的RU值与结合噻虫啉溶液前的RU值相同，并根据结合反应前后RU变化值与噻虫啉浓度来建立标准曲线，获得待测样品中噻虫啉的含量。