[发明专利]一种批量制备人工诱导雌核发育石斑鱼的方法

摘要

本发明公开了一种批量制备人工诱导雌核发育石斑鱼的方法，将批量紫外照射处理的鞍带石斑鱼稀释精液作为刺激源，与棕点石斑鱼卵子进行授精；激活后7分钟转入预先装有(4℃±0.5℃)海水的冷休克处理箱中，低温休克处理10分钟，使用多个冷休克处理箱可实现更大量的卵子休克处理；进行复温至常温处理，然后经孵化桶孵化；制备过程中使用对照组倍性分析数据对获得的胚胎进行检测，实现质量控制。通过本发明的方法，能够实现批量高效制备雌核发育石斑鱼纯系群体，为培育优良石斑鱼品种奠定基础。

主权项

1.一种批量制备人工诱导雌核发育石斑鱼的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)石斑鱼精子遗传物质批量灭活处理a、雄鱼的选择和精子的采集：选择体格健壮、体重为60～80kg/尾的鞍带石斑鱼雄性成鱼为亲本，置于海上网箱或陆地池塘进行培育，投喂冰鲜杂鱼和鱿鱼进行培育；待海水平均温度稳定在28～32℃时，采用麻醉剂将其麻醉后捞出水面置于帆布担架内挤精；得到鞍带石斑鱼鲜精后，使用精子稀释液按照1:8～10比例稀释，0～4℃冷藏保存；b、精子遗传物质批量灭活：将8个培养皿同时铺上稀释过的鞍带石斑鱼精液，精子液面厚度控制在0.25～0.35mm，置于紫外灯箱中照射；每次照射时间为4分钟，照射过程中遮蔽自然光并置于摇床中进行，保持60～80rpm摇动速度以确保精子照射均匀，紫外光照射剂量为40～60mJ/cm²，照射后快速将照射液转入收集管进行收集，于0～4℃冷藏避光保存，以备用；c、人工授精的方法：鞍带石斑鱼精子紫外照射处理完成后，收集精子置于冰上避光保存；将待产棕点石斑鱼雌鱼捞出，擦干体表水分，将成熟卵子挤入干燥刻度烧杯中；按照1ml处理精子授精10ml卵子的比例进行精卵人工混合，混合后加入洁净自然海水搅拌30秒，完成人工授精；(2)批量冷休克诱导石斑鱼卵子使用制冷机提前制备预冷的海水，往冷休克处理箱注入预冷海水，并与制冷机连接循环控温；人工干拌法授精后7分钟，按照每50ml卵子使用2000～4000ml预冷3.5～4.5℃海水的比例立即转入装有预冷海水的冷休克处理箱中，低温休克处理10分钟；经孵化桶孵化获得人工培育石斑鱼鱼苗；(3)人工雌核发育诱导质量控制采用正常杂交组、精子照射未休克组及雌核发育组，来实现制备人工雌育的质量控制；收集三个组发育超过16小时的胚胎，DAPI染色，Partac倍性分析仪检测，正常杂交组孵化率≥80％；精子照射未休克组受精率≥60％，二倍体率和孵化率＜10％以下；雌核发育组≥60％，孵化率≥30％即为合格人工雌核发育。