[发明专利]Treg细胞的培养液及其培养方法与应用有效
| 申请号： | 201910230523.8 | 申请日： | 2019-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN109913415B | 公开（公告）日： | 2020-05-22 |
| 发明（设计）人： | 谢海涛;郭东升;王乃会;姚余卫 | 申请（专利权）人： | 广东先康达生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783;A61P5/00;A61P3/00;A61P15/08;A61P19/02;A61P19/10;A61P1/00;A61P3/06;A61P9/10;A61P3/10 |
| 代理公司： | 深圳灼华创睿专利代理事务所(普通合伙) 44524 | 代理人： | 佟巍巍 |
| 地址： | 523000 广东省东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种Treg细胞的培养液及其培养方法与应用，Treg细胞的培养液的培养方法包括以下步骤：S110：将CD4+CD25+Treg细胞和hUC‑MSCs按照一定比例共同培养48h‑72h，离心取上清液；S220：制备外周血PBMC及血浆，将所述血浆灭活，离心待用；S330：向S110获得的上清液中加入细胞因子、钙离子载体、S220所得的血浆和RPMI1640培养液配制成Treg细胞培养液；S440：将外周血PBMC按照一定的密度接种于S330配制的Treg细胞培养液中，培养48h‑96h；S550：收集细胞，细胞活率大于90%，CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达量大于65%，CD4+CD25+Foxp3+Helios+Treg细胞占CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达量大于90%。解决了Treg细胞培养操作复杂和周期过长的问题，解决了外周血CD4+CD25+Foxp3+Helios+Treg细胞的含量过低和因自体疾病问题导致自体Treg细胞质量低下的患者而不能进行Treg细胞治疗的问题。 | ||
| 搜索关键词： | treg 细胞 培养液 及其 培养 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种通用性Treg细胞的培养液的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：S110：将CD4+CD25+Treg细胞和 hUC‑MSCs按照一定比例密度共同培养48‑72h，然后离心取上清液；S220：制备外周血PBMC及血浆，将所述血浆灭活，离心待用；S330：向S110获得的上清液中加入细胞因子、钙离子载体、S220所得的血浆和RPMI1640培养液配制成Treg细胞培养液；S440：将外周血PBMC按照一定的密度接种于S330配制的Treg细胞培养液中，培养48h‑96h；S550：收集细胞，细胞活率大于90%，CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达量大于65%，CD4+CD25+Foxp3+Helios+Treg细胞占CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达量大于90%。
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