[发明专利]微波萃取-固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测畜禽粪便中7种结合态雌激素的方法

摘要

本发明涉及一种微波萃取‑固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测畜禽粪便中7种结合态雌激素的方法。该方法为：(1)粪便样品预处理，分别加入17β‑雌二醇D3 3‑β‑D‑葡糖苷酸、17β‑雌二醇硫酸钠‑D4这两种指示回收率的内标物；再经提取溶剂微波萃取、过滤收集提取液，用水稀释，调pH值；(2)固相萃取富集净化目标雌激素；(3)采用内标法，用液质联用仪定量检测畜禽粪便中7种结合态雌激素。该方法通过对提取方法、富集净化条件、液质检测条件进行优化，同时通过选用合适的内标物，可一次性同时检测出畜禽粪便中7种结合态雌激素的残留情况，具有高回收率、高灵敏度、高稳定性、低检测限、检测结果更真实可靠等优点。

主权项

1.一种微波萃取‑固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测中粪便中7种结合态雌激素的方法，其特征在于，按以下步骤进行：(1)结合态雌激素的提取：微波萃取称取经冷冻干燥、粉碎、过筛后的畜禽粪便样品，加入指示回收率的内标物，再加入提取溶剂，经微波萃取、过滤后收集提取液，用超纯水稀释，调节pH值；所述的指示回收率的内标物为17β‑雌二醇D₃ 3‑β‑D‑葡糖苷酸、17β‑雌二醇硫酸钠‑D₄；(2)富集净化：固相萃取依次用等体积的甲基叔丁基醚、甲醇、超纯水活化固相萃取柱，将经步骤(1)处理过的样品过柱，控制样品过柱流速；富集完后，用淋洗液淋洗固相萃取柱，并真空干燥固相萃取柱；再用一定体积的甲醇洗脱目标物，洗脱液再经过甲醇活化过的氨基柱进行净化，经氮吹仪吹干，获得残渣；将残渣用一定浓度的有机溶剂溶解、定容、超声、过滤后转移至进样瓶，待测；(3)高效液相色谱串联质谱法测定畜禽粪便中7种结合态雌激素的含量采用内标法，用高效液相色谱串联质谱仪，定量检测经步骤(2)处理得到的进样瓶内的待测样品中从畜禽粪便中富集到的7种结合态雌激素的含量；所述的7种结合态雌激素分别为：雌酮3‑(BETA‑D‑葡糖苷酸)钠盐、17β‑雌二醇17‑硫酸钾盐、BETA‑雌二醇3‑硫酸钠盐、17β‑雌二醇3‑(β‑D‑葡糖苷酸)钠盐、雌三醇‑3‑O‑β‑D葡糖苷酸钠盐、雌酮3‑硫酸钠、17β‑雌二醇17‑β‑D葡糖苷酸。