[发明专利]低温几丁质酶基因chiA在乳酸克鲁维酵母中的表达纯化方法在审
| 申请号： | 201910235601.3 | 申请日： | 2019-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN109825490A | 公开（公告）日： | 2019-05-31 |
| 发明（设计）人： | 陈立功;王晓辉;迟乃玉;张庆芳 | 申请（专利权）人： | 大连大学 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42;C12N15/56;C12N15/81;C12R1/645 |
| 代理公司： | 大连八方知识产权代理有限公司 21226 | 代理人： | 朱秀芬 |
| 地址： | 116622 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程、微生物学、酶工程、及发酵工程领域，提供了一种低温几丁质酶基因chiA(chitinase A)在乳酸克鲁维酵母中的表达纯化方法。本发明方法，成功构建产低温几丁质酶chiA的重组乳酸克鲁为酵母并纯化获得高纯度的重组几丁质酶chiA，利用镍柱亲和层析纯化得到较纯的重组几丁质酶chiA，经SDS‑PAGE分析在110kDa附近出现符合预期大小的蛋白条带。本发明使得表达的几丁质酶chiA大部分分泌到细胞外，从而降低了分离纯化成本，提高了表达效率。纯化蛋白chiA的蛋白浓度为1.26mg/mL，酶活力为51.45U/mg。本发明对纯化后的几丁质酶ChiA进行了温度及温度稳定性、pH及pH稳定性、协同降解作用等酶学性质研究，为该酶的工业化应用奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 几丁质酶chiA 乳酸克鲁维酵母 几丁质酶基因 重组几丁质酶 蛋白 酶学性质研究 镍柱亲和层析 工业化应用 温度稳定性 表达效率 纯化蛋白 发酵工程 分离纯化 基因工程 高纯度 酶工程 酶活力 构建 降解 酵母 乳酸 条带 分泌 协同 细胞 分析 成功 | ||
【主权项】：
1.一种低温几丁质酶基因chiA的表达纯化方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)构建pKLAC2‑chiA表达载体；(2)将上述表达载体导入乳酸克鲁维酵母中，筛选得到表达低温几丁质酶基因chiA的工程菌；(3)培养上述工程菌，诱导低温几丁质酶基因chiA表达；(4)诱导表达后纯化，获得所需重组蛋白ChiA。
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