[发明专利]一种从石蜡包埋组织切片提取核酸的方法在审
申请号: | 201910241611.8 | 申请日: | 2019-03-28 |
公开(公告)号: | CN110093342A | 公开(公告)日: | 2019-08-06 |
发明(设计)人: | 张建东;宋克清;孙诚;田鸽;杨宁;王伟 | 申请(专利权)人: | 凡知医疗科技(江苏)有限公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 215300 江苏省苏州市*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明公开了一种从石蜡包埋组织切片提取核酸的方法,1、包括以下步骤:S1,石蜡包埋切片;S2,裂解:将S1中备用的切片组织取出,向组织切片中加入新型裂解液,组织切片和新型裂解液的体积比为1:50~100,在65~75℃的温度下混合摇匀10~15min后,对其进行离心分层,分层后静置,取静置后的中间层,得到混合液;S3,结合;S4,洗涤;S5,洗脱。本发明使用新型裂解液对切片组织进行核酸的裂解,可以充分、有效地裂解细胞,加快裂解进程,同时,保护核酸免受氧化,避免DNA自身二聚体形成;具有用时短、提取效率高,且提取质量高的特点,适用于推广使用。 | ||
搜索关键词: | 切片 裂解液 裂解 石蜡包埋组织 提取核酸 组织切片 核酸 二聚体形成 离心分层 裂解细胞 石蜡包埋 提取效率 混合液 体积比 有效地 中间层 分层 洗脱 摇匀 用时 洗涤 备用 取出 进程 | ||
【主权项】:
1.一种从石蜡包埋组织切片提取核酸的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1,石蜡包埋切片:将石蜡包埋组织放在石蜡切片机上进行切片,切片组织的片厚为3~7μm,切片组织漂浮于摊片机内的温水上,将组织展平,并用载玻片将待提取的组织捞起,放入烘箱中烘烤,待水分烘干后取出,作为待测样品常温保存留作备用;S2,裂解:将S1中备用的切片组织取出,向组织切片中加入新型裂解液,组织切片和新型裂解液的体积比为1:50~100,在65~75℃的温度下混合摇匀10~15min后,对其进行离心分层,分层后静置,取静置后的中间层,得到混合液;S3,结合:向S2中的混合液中加入磁珠结合液和纳米磁珠,磁珠结合液与裂解液的体积比为1:1.1~1.5,纳米磁珠和裂解液的体积比为10:1,在外部磁场的作用下,得到磁珠‑核酸复合物;S4,洗涤:向S3中的磁珠‑核酸复合物中加入洗涤液,洗涤液与裂解液的体积比1:2.2~2.5,为离心转动下去除磁珠‑核酸复合物上的杂质;S5,洗脱:向S4中洗涤后的磁珠‑核酸复合物中加入洗脱液,洗脱液与裂解液的体积比1:2.1~2.3,于52~56℃的温度下洗脱3~5min,使核酸从磁珠表面解吸附并进入洗脱液中,通过磁力作用使离心管内磁珠紧贴于离心管壁,转移洗脱液至新的离心管内,得到高质量的核酸。
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