[发明专利]一种提取谷子种子总RNA的方法在审
| 申请号： | 201910246338.8 | 申请日： | 2019-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN109762811A | 公开（公告）日： | 2019-05-17 |
| 发明（设计）人： | 温银元;王金荣;许冰霞;尹美强;裴帅帅;柯贞进;赵娟;王计平;冯文新;王玉国 | 申请（专利权）人： | 山西农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 太原华弈知识产权代理事务所 14108 | 代理人： | 梁丽丽 |
| 地址： | 030801 山*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种提取谷子种子总RNA的方法，包括以下步骤；（1）将0.1 g液氮研磨的谷子种子细粉中加入0.7 mL的RNA提取缓冲液，所述提取缓冲液成分为：Tris‑HCl、PVP、β‑巯基乙醇依次加入水配制而成；（2）取上清加1 mL的RNAiso Plus；（3）取上清再加入氯仿并混合均匀；（4）取上层液转移至另一新离心管中，加入等体积的异丙醇；（5）弃上清，加乙醇洗涤沉淀后室温干燥，加入RNase‑free水溶解，得到RNA提取液。本发明提取谷子种子总RNA的方法，提高了RNA的质量和浓度，减少了蛋白质和盐离子污染，解决了谷子RNA提取质量差的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 谷子种子 总RNA 提取缓冲液 室温干燥 液氮研磨 乙醇洗涤 巯基乙醇 离心管 上层液 水配制 水溶解 盐离子 异丙醇 质量差 氯仿 细粉 蛋白质 沉淀 污染 | ||
【主权项】：
1.一种提取谷子种子总RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤；（1）将0.1 g液氮研磨的谷子种子细粉中加入0.7 mL的RNA提取缓冲液，所述提取缓冲液为Tris‑HCl、PVP、β‑巯基乙醇依次加入水配制而成，上述组分的体积比为：1M Tris‑HCl：10% w/vPVP：β‑巯基乙醇：水=5：5：1：39，混匀静置15 min，12000g ，4℃离心10 min；（2）取上清加1 mL的RNAiso Plus，混匀室温静置10min，12 000g，4℃离心5 min；（3）取上清再加入步骤2中RNAiso Plus1/5体积的氯仿并混合均匀，室温静置5 min，12 000 g，4℃离心15 min；（4）取上层液转移至另一新离心管中，加入等体积的异丙醇，充分混匀后在室温静置10 min，12 000g，4℃离心10 min；（5）弃上清，加1 mL75％乙醇洗涤沉淀后室温干燥，加入30 μL RNase‑free水溶解，得到RNA提取液，‑80℃保存。
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